p-delta-blue基因工程的基本操作程序：

1、目的基因的获取

（1）目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因。

（2）获取方法：①从基因文库中获取；②人工合成（反转录法和化学合成法）；③PCR技术扩增目的基因。

2、基因表达载体的构建

（1）p-delta-blue目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。

（2）组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。

(1)将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DN**段之间连接形成的产物有目的基因和载体连接物、载体和载体连接物、目的基因和目的基因连接物三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行分离、纯化(或筛选)。

(2)p-delta-blue用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是载体和载体连接物；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物有目的基因和载体连接物、载体和载体连接物。

(3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是，其合成的产物是启动子mRNA。

(4)p-delta-blue在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是_EcoRⅠ和BamHⅠ。XY90603随机引物法DNA探针标记试剂盒5次(A)XY90604PCR法DNA探针标记试剂盒5次(A)XY90605TdT加尾法DNA探针标记试剂盒5次(A)XY131036DNA 5’末端标记试剂盒10次XY100210dNTP溶液(标记专用)0.5mLXY100920生物素标记dUTP溶液50μLXY100921地高辛标记dUTP溶液25μLXY120631Aminoally-dUTP溶液100μLXY120630Fluorescein -12- dUTP溶液25μLXY130995Cy3-dCTP溶液25μLXY130996Cy5-dCTP溶液25μLXY121122柱式探针纯化试剂盒10次XY121110超快核酸转膜试剂盒5次(A)|5次(B)XY70104核酸印迹膜染液100mLXY80915超级杂交液100mL(A)|100mL(B)XY130904超级杂交液(Oligo探针)10mLXY130905超级杂交液(芯片)10mLXY130906超级杂交液(原位杂交)10mLXY131208DNA探针变性液10mLXY100405SSC溶液，20×100mLXY100809SSPE溶液，20×100mLXY70907去离子甲酰胺100mLXY100812BLOTTO溶液100mLXY70904酵母tRNA溶液1.5mL(A)|1.5mL(B)XY91104Denhardt溶液，50×100mL(A)|100mL(B)XY100604鲑鱼精DNA溶液1mLXY130908鲱鱼精DNA溶液1mLXY131207小牛胸腺DNA溶液1mLXY130810荧光尺1个XY120643硫酸葡聚糖1gXY120644聚乙二醇100gXY120674酪蛋白50gXY130907脱脂奶粉(杂交专用)50gXY120676Southern封堵液(NC专用)50mLXY120677Southern封堵液(Nylon专用)50mLXY100930**纤维素膜1张(A)|1张(B)XY120930分子杂交炉1台XY120931紫外交联仪1台XY121114非同位素探针杂交试剂盒5次(A)|5次(B)XY100847BCIP-NBT法地高辛杂交检测试剂盒5次XY100848ECL法地高辛杂交检测试剂盒5次XY131001AP标记的抗地高辛抗体10μLXY131002AP标记的抗生物素抗体10μLXY131003HRP标记的抗地高辛抗体10μLXY131004HRP标记的抗生物素抗体10μLXY130807显影定影试剂盒1套XY130808显影粉1袋XY130809定影粉1袋XY131117DNA 包被溶液100mLXY1311654× 核酸液相杂交液10mLXY121206DNA 稀释液10mL

细胞及免疫学