pAG416GPD-ECFP-ccdB基因工程的基本操作程序：

1、目的基因的获取

（1）目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因。

（2）获取方法：①从基因文库中获取；②人工合成（反转录法和化学合成法）；③PCR技术扩增目的基因。

2、基因表达载体的构建

（1）pAG416GPD-ECFP-ccdB目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。

（2）组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。

(1)将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DN**段之间连接形成的产物有目的基因和载体连接物、载体和载体连接物、目的基因和目的基因连接物三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行分离、纯化(或筛选)。

(2)pAG416GPD-ECFP-ccdB用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是载体和载体连接物；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物有目的基因和载体连接物、载体和载体连接物。

(3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是，其合成的产物是启动子mRNA。

(4)pAG416GPD-ECFP-ccdB在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是_EcoRⅠ和BamHⅠ。XY870901 柱式真菌DNAOUT 50次

XY8100303 玻璃珠法柱式真菌DNAOUT 50次

XY880926 大提柱式真菌DNAOUT 4次

XY880803 柱式动物线粒体DNAOUT，PCR级 50次

XY8120501 柱式动物线粒体DNAOUT，测序级 15次

XY8130831 丝状真菌线粒体DNAOUT 15次

XY8120406 柱式植物叶绿体DNAOUT 10次

XY8101101 线状DNA清除剂 30次

XY860707 细菌DNAOUT 50次|250次

XY860802 柱式细菌DNAOUT 50次(A)|50次(B)

XY880927 大提柱式细菌DNAOUT 4次(A)|4次(B)

XY860806 一步式细菌DNAOUT 50次

XY870702 分枝杆菌DNAOUT 50次

XY870703 柱式分枝杆菌DNAOUT 50次

XY860701 土壤DNAOUT 30次|100次

XY871205 柱式土壤DNAOUT 50次

XY880928 大提柱式土壤DNAOUT 4次

XY8101112 柱式水样DNAOUT 50次

XY83674 一管式病毒DNAOUT 50次|200次

XY870701 柱式病毒DNAOUT 50次

XY880921 96孔板病毒DNAOUT(离心法) 1次|5次

XY880101 一管式病毒DNA-RNAOUT 50次

XY870202 柱式酵母质粒DNAOUT 50次

XY890607 柱式BAC DNAOUT 50次

XY890608 中提柱式BAC DNAOUT 5次