1、用pLenti-C-tRFP 质粒先做一下转化，把质粒转入感受态细胞内

2、将菌液涂到LB平板上倒置、过夜培养

3、挑取单克隆菌落，打入5毫升左右的液体LB，摇床12-16小时，吸取两毫升左右菌液，做一个小提，测浓度，跑胶，4、确定提出来之后，再用剩余菌液按1:100比例加入液体LB，摇床12-16小时

5、摇床结束后，用去内毒素的中提或者大提，可以留几毫升菌液加入适量甘油制成甘油菌冻-80，提出来的pLenti-C-tRFP 质粒就可以用于转染了。

如果想直接用甘油菌，那么只需要做第四第五步就行。

以Invitrogen的Lipofectamine 2000为例，需要注意以下几点：

1、DNA的量：Lipofectamine 2000=1：2~3

2、细胞密度大约占培养板的80%左右，转染。

3、转染期间不要加抗生素，否则会导致细胞死亡。

pLenti-C-tRFP 质粒步骤如下：以24孔培养板为例：

1、转染前一天细胞换新的培养基

2、制备DNA-Lipofectamine 2000复合物，如下:

a、用50ul无血清培养基稀释DNA（0.8g），轻轻混匀；

b、Lipofectamine 2000使用前，轻轻混匀，用48ul无血清培养基稀释2ul Lipofectamine 2000，轻轻混匀，室温孵育5分钟；

c、将a+b的液体加在一起，pLenti-C-tRFP 质粒轻轻混匀，室温孵育20分钟，使DNA-Lipofectamine 2000复合物形成；

3、将100ul DNA-Lipofectamine 2000复合物加入培养板中，轻轻前后摇匀；

4、放入37度孵箱中培养24~48h后，1：10传代，加入G418筛选。加入G418的量最好设几个梯度或者转染前做MTT，找好G418对你所转细胞致死量的浓度。

5、等细胞在G418作用下，长满后冻存几支（保种）。再克隆化培养：将细胞消化后计数50个细胞，加入22ml完全培养基中，混匀，分装在96孔板中（200ul/孔）。第二天在显微镜下，pLenti-C-tRFP 质粒寻找孔中有单个细胞的孔并做标记，等做标记的孔长满后，消化、转移到4孔或6孔培养板中，最后转移到培养瓶中培养，冻存，鉴定。

6、鉴定成功后，建议马上做后续实验，因为在培养过程或冻存中，转进去的基因容易从细胞中掉下来。XY3801 新型大量植物DNA快速提取试剂盒 10次

XY2001 酵母基因组DNA快速提取试剂盒(离心柱型) 50次

XY2801 酵母基因组DNA提取试剂盒(溶液型) 50次/100次

XY2901 中量/大量酵母基因组DNA提取试剂盒(溶液型) 10次

XY1601 凋亡DNA Ladder快速提取试剂盒 20次/50次

XY1701 选择性凋亡DNA Ladder抽提试剂盒 25次/50次

XY1801 凋亡小体/hoeschst染色试剂盒 100次

XY1901 Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒 25次/50次

XY3901 唾液DNA收集保存运输提取试剂盒 2ml×10次/2ml×50次

XY2101 M13噬菌体单链基因组DNA快速提取试剂盒 50次/100次

XY2201 λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂盒 50次/100次

XY2701 SoilPure超纯土壤基因组DNA快速提取试剂盒 50次

XY2301 粪便基因组DNA快速提取试剂盒 50次

XY4001 病毒基因组DNA快速提取试剂盒 50次

XY2501 微量/临床样品基因组DNA快速提取试剂盒 50次

XY3001 口腔/咽拭子基因组DNA快速提取试剂盒 50次

XY2601 DNAzol 基因组DNA快速提取试剂 50ml/100ml

XY3201 石蜡包埋组织DNA快速提取试剂盒 50次/100次

XY3601 尿液基因组DNA快速提取试剂盒 50次

XY3701 海洋动物组织基因组DNA快速提取试剂盒 50次/100次

XY4201 蛋白酶K 100mg

XY3301 2 x SYBR Green qPCR Mix (Sybr green荧光染料法定量PCR) 50次×50μl/200次×50μl

XY3901 2 x Real Time PCR Mix (Probe荧光探针法定量PCR) 40次×50μl/200次×50μl