HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase逆转录酶-酶-试剂-生物在线

HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase逆转录酶

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产品名称： HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase逆转录酶

英文名称： HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase逆转录酶

产品编号： 11105ES92

产品价格： 0

产品产地： Yeasen

品牌商标： Yeasen

更新时间： 2023-08-17T13:40:59

使用范围： null

翌圣生物科技（上海）股份有限公司

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产品详情

产品信息
产品名称 产品编号 规格 储存 价格（元）
Hieff^TM M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase逆转录酶 11105ES92 10000 U -20℃ 368.00
Hieff^TM M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase逆转录酶 11105ES93 5×10000 U -20℃ 1586.00
产品描述
Hieff^TM M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase是通过点突变技术得到的RNase H活性缺失的逆转录酶。野生型的M-MLV包含RNase H活性，该活性可催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因而在cDNA第一条链的合成过程中可能会降解DNA/RNA杂合体中的模板RNA，影响cDNA合成长度和得率。与野生型M-MLV相比，Hieff^TM M-MLV (H^-)的扩增能力增强，可扩增长达8 kb的cDNA。此外，其热稳定性大幅度提高，可耐受高达42℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。
产品组分
编号 组分 产品编号/规格
11105ES92 (10000 U) 11105ES93 (5×10000 U)
11105-A 5×Hieff^TM M-MLV (H^-) Buffer 250 μL 5×250 μL
11105-B Hieff^TM M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase (200 U/μL) 50 μL 5×50 μL
产品应用
全长cDNA文库构建；终点法PCR；实时定量PCR等。
活性定义
以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。
 
质量控制
核酸外切酶残留检测：200 U本酶和1 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA，37℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：200 U本酶和1 μg小鼠肝脏总RNA，37℃下孵育1 h，RNA电泳谱带不发生变化。
运输与保存方法
冰袋运输。-20 ℃保存。
注意事项
1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；
2）所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解；
3）为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本；
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

第一链cDNA合成操作步骤
1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）
组分 使用量
RNase free ddH₂O to 13 μL
Oligo (dT)₁₈(50 μM)
or Random Primers (50 ng/μL)  
or Gene Specific Primers (2 μM) 1 μL
or 1 μL
or 1 μL
模板RNA Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng
65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液，并用移液器轻轻吹打混匀。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
组分 使用量
上一步的反应液 13 μL
5×Hieff^TM M-MLV (H^-) Buffer 4 μL
dNTP Mix (10 mM) 1 μL
Hieff^TM M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase (200 U/μL) 1 μL
RNase inhibitor (40 U/μL) 1 μL
3. 逆转录程序设置
温度 时间
25℃ 5 min
42℃ 30-60 min
85℃ 5 min
【注】：1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)₁₈或Gene Specific Primers，此步可省略；
2）逆转录温度：推荐使用42℃；
3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。
※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
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产品名称	产品编号	规格	储存	价格（元）
Hieff^TM M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase逆转录酶	11105ES92	10000 U	-20℃	368.00
Hieff^TM M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase逆转录酶	11105ES93	5×10000 U	-20℃	1586.00

编号	组分	产品编号/规格
编号	组分	11105ES92 (10000 U)	11105ES93 (5×10000 U)
11105-A	5×Hieff^TM M-MLV (H^-) Buffer	250 μL	5×250 μL
11105-B	Hieff^TM M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase (200 U/μL)	50 μL	5×50 μL

组分	使用量
RNase free ddH₂O	to 13 μL
Oligo (dT)₁₈(50 μM) or Random Primers (50 ng/μL) or Gene Specific Primers (2 μM)	1 μL
	or 1 μL
	or 1 μL
模板RNA	Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng

组分	使用量
上一步的反应液	13 μL
5×Hieff^TM M-MLV (H^-) Buffer	4 μL
dNTP Mix (10 mM)	1 μL
Hieff^TM M-MLV (H^-) Reverse Transcriptase (200 U/μL)	1 μL
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产品名称	产品货号	规格	价格（元）
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dNTP Mix (10 mM each)	10124ES76	500 μL	76.00
dNTP Mix (10 mM each)	10124ES80	1 mL	136.00
Murine RNase inhibitor (40 U/μL)	10603ES05	2 KU	216.00
Murine RNase inhibitor (40 U/μL)	10603ES10	10 KU	916.00
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