第二代耐热逆转录酶上海翊圣生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: 第二代耐热逆转录酶
英文名称: HifairTM II Reverse Transcriptase
产品货号: 11110ES92
产品规格: 10000 U
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 626元
保存与运输: -20℃
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/9/22 22:08:00
浏览人数:297
诚信指数:889点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海翊圣生物科技有限公司
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产品详细描述

产品信息

产品名称

产品编号

规格

储存

价格(元)

HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase 第二代耐热逆转录酶

11110ES92

10000 U

-20℃

626.00

HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase 第二代耐热逆转录酶

11110ES93

5×10000 U

-20℃

2456.00

产品描述

HifairTM Ⅱ Reverse TranscriptaseHieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶,与HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受高达50℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kb的cDNA

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

11110ES92 (10000 U)

11110ES93 (10000 U)

11110-A

5×HifairTM Ⅱ Buffer

250 μL

5×250 μL

11110-B

HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase (200 U/μL)

50 μL

5×50 μL

产品应用

全长cDNA文库构建;终点法PCR;实时定量PCR等。

活性定义

Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制

核酸外切酶残留检测:200 U本酶和1 μg λDNA-Hind Ⅲ,37℃下孵育1 h,DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测:200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA37℃下孵育1 h,DNA的电泳谱带不发生变化。

RNase残留检测:200 U酶和1 μg小鼠肝脏总RNA37℃下孵育1 h,RNA电泳谱带不发生变化。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。

注意事项

1)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染;

2)所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解;

3)为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本;

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

组分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 ng/μL)  

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液,并用移液器轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×HifairTM Ⅱ Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase (200 U/μL)

1 μL

RNase inhibitor (40 U/μL)

1 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

42℃

30-60 min

85℃

5 min

【注】:1)当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18Gene Specific Primers,此步可省略;

2)逆转录温度:推荐使用42℃。对于GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到50℃

3)85℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

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产品名称

产品货号

规格

价格(元)

HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶

11111ES92

10000 U

1426.00

11111ES93

5×10000 U

4626.00

HifairTM Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)

11121ES50

50 T

616.00

11121ES70

200 T

1826.00

dNTP Mix (10 mM each)

10124ES76

500 μL

76.00

10124ES80

1 mL

136.00

Murine RNase inhibitor (40 U/μL)

10603ES05

2 KU

216.00

10603ES10

10 KU

916.00

2×HieffTM PCR Master Mix (With Dye)

10102ES03

1 mL

40.00

10102ES08

5×1 mL

150.00

Hieff CanaceTM High-Fidelity DNA Polymerase

10135ES60

100 U

626.00

10135ES76

500 U

2356.00

HB170622

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