产品详细描述

 产品内容：

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体×1支，-20℃保存。

 试剂四：液体×1瓶，4℃保存。

    工作液配制：临用前，在试剂二中加入试剂一40 mL，充分震荡溶解后加入全部试剂三，混匀。（当天用完）

产品说明：

谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px）是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。

GSH-Px催化H₂O₂氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP⁺；NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP⁺没有；可以通过测定340 nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。

自备仪器和用品：

紫外-可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取0.1g 组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测(如上清不清澈，再离心3min)。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量10⁴个：试剂一体积（ml）500~1000:1 的比例，建议500 万细胞加入1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 s，间隔7s，总时间3min）然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置冰上待测(如上清不清澈，再离心3min)。

3. 血清等液体：直接测定。

二、GSH-Px测定操作：

1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。

2. 混合试剂在25℃或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min以上。

3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸馏水、800μL预热的工作液，100μL试剂四，迅速混匀后于340nm处测定第10 s处的吸光值，37℃水浴3min后迅速拿出测量吸光度，分别记为A空1和A空2。计算△A空=A空1-A空2。（空白管只需做1~2个）

4. 测定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、800μL预热的工作液，100μL试剂四，迅速混匀后于340nm处测定第10 s处的吸光值，37℃水浴3min后迅速拿出测量吸光度，分别记为A测1和A测2。计算△A测=A测1-A测2。

三、GSH-Px活性计算：

（1）按蛋白浓度计算

GSH-Px活力单位定义：一定温度下，每mg蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol NADPH氧化定义为一个酶活力单位。

GSH-Px (U/mg prot) =[ (△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×10⁶] ÷[Cpr×V样]÷T

             =536×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

GSH-Px活力单位定义：一定温度中，每g样品在反应体系中每分钟催化1μmol NADPH氧化定义为一个酶活力单位。

GSH-Px (U/g 鲜重)=[ (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总×10⁶] ÷(V样TUNEology 波长可调检测卡盒-->