硫氧还蛋白过氧化物酶测定试剂盒北京索莱宝科技有限公司

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性能参数

产品名称: 硫氧还蛋白过氧化物酶测定试剂盒
英文名称: Thioredoxin Peroxidase (TPX) Assay Kit
产品货号: BC1200
产品规格: 50管/24样
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三
产品商标: Solarbio
价    格: 450元
保存与运输: 4℃保存或-20℃保存;
现货状态: 现货
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/12/10 8:59:00
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诚信指数:1359点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京索莱宝科技有限公司
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北京市通州区马驹桥镇联东U谷景盛南四街15号85A三层
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产品详细描述

 产品内容

    试剂一:液体×1瓶,室温保存。

    试剂二:液体×1瓶,-20保存。

    试剂三:液体×1瓶,4保存。

产品说明

    TPX属于过氧化物酶家族,在体内主要通过还原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化作用,功能与GPX类似,也是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。TPX普遍存在于各种生物体内,如酵母、植物、动物、原生动物、寄生虫、细菌和古细菌,在进化上高度保守。TPX与细胞增殖、分化、细胞凋亡及肿瘤发生调控密切相关TPX的主要功能包括细胞脱毒、抗氧化和调节由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应。

    TPX催化H2O2氧化二硫苏糖醇(DTT),H2O2的吸收波长为240nm,通过测定240nm吸光度的下降速率,通过对照减去过氧化氢酶(CAT)催化分解的H2O2,即可计算出TPX活性。因此本试剂盒可以同时测定样品TPXCAT活性。

自备仪器和用品:

    紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。

操作步骤:

一、粗酶液提取:

1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)15~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000rpm4离心10min,取上清置冰上待检测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为500~10001 的比例(建议500 万细胞加入1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3 s,间隔7s,总时间3min),然后8000rpm4,离心10min,取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体:直接测定。

二、TPX测定操作:

1. 分光光度计预热30 min后,调节波长到240 nm,用蒸馏水调零。

2. 试剂一和试剂二25(一般物种)或者37(哺乳动物)水浴预热30min

3. CAT活性测定管:取1mL石英比色皿,加入20μL上清液,900μL试剂一80μL试剂三,迅速混匀后于240 nm测定10 s130s吸光度,记为A1A2

4. 总活性测定管:取1mL石英比色皿,加入20μL上清液,900μL试剂二,80μL试剂三,迅速混匀后于240 nm测定10 s130s吸光度,记为A3A4

注意:每个样品都需要做对照管,以减去过氧化氢酶(CAT)催化降解的H2O2

三、TPX活性计算:

1)按蛋白浓度计算

活性单位(U)定义:在25或者37中,每毫克蛋白每分钟催化1nmol H2O2降解为一个酶活力单位。

CAT活性(nmol/min/mg prot=(A1-A2) ÷ε÷d×V反总÷(Cpr×V)÷T

                           =573×(A1-A2) ÷Cpr

总活性nmol/min/mg prot=(A3-A4) ÷ε÷d×V反总÷(Cpr×V)÷T

                         =573×(A3-A4) ÷Cpr

TPX活性nmol/min/mg prot=总活性-CAT活性

2)按样本质量计算

活性单位(U)定义:在25或者37中,每克样每分钟催化1nmol H2O2降解为一个酶活力单位。

CAT活性(nmol/min/g=(A1-A2) ÷ε÷d×V反总÷(W×V÷V样总)÷T

                     =573×(A1-A2) ÷W

总活性nmol/min/g=(A3-A4) ÷ε÷d×V反总÷(W×V÷V样总)÷T

                   =573×(A3-A4) ÷W

TPX活性nmol/min/g=总活性-CAT活性

3)按细胞数量计算

活性单位(U)定义:在25或者37中,每104 个细胞每分钟催化1nmol H2O2降解为一个酶活力单位。

CAT活性(nmol/min/104 cell=(A1-A2) ÷ε÷d×V反总÷(细胞数量×V÷V样总)÷T

                     =573×(A1-A2) ÷细胞数量

总活性nmol/min/104 cell=(A3-A4) ÷ε÷d×V反总÷(细胞数量×V÷V样总)÷T

                   =573×(A3-A4) ÷细胞数量

TPX活性nmol/min/104 cell=总活性-CAT活性

3)按液体体积计算

活性单位(U)定义:在25或者37中,每毫升液体每分钟催化1nmol H2O2降解为一个酶活力单位。

CAT活性(nmol/min/mL=(A1-A2) ÷ε÷d×V反总÷V÷T

                     =573×(A1-A2) 

总活性nmol/min/mL=(A3-A4) ÷ε÷d×V反总÷V÷T

                   =573×(A3-A4) 

TPX活性nmol/min/mL=总活性-CAT活性

    εH2O2的微摩尔消光系数,43600 L/ mol/cm=0.0436 L/ μmol/cmd:比色皿光径,1cmV反总:反应体系总体积(L),1000μL=0.001 LCpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL);V样:加入反应体系中上清液体积(mL),20μL=0.02 mLT:反应时间(min),2 minW:样品鲜重,gV样总:提取液体积,1mL

 

 

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