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Hieff 热启动 Pfu高保真酶10115ES

Hieff 热启动 Pfu高保真酶10115ES

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产品名称: Hieff 热启动 Pfu高保真酶10115ES

英文名称: Hieff HS Pfu DNA Polymerase

产品编号: 10115ES60

产品价格: 0

产品产地: 翌圣生物

品牌商标: Yeasen

更新时间: 2023-08-17T13:40:59

使用范围: null

翌圣生物科技(上海)股份有限公司
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产品性质
产品名称 产品编号 规格 储存 价格(元)
HieffTM HS Pfu DNA Polymerase 热启动型高保真酶 10115ES60 100U -20 455
HieffTM HS Pfu DNA Polymerase 热启动型高保真酶 10115ES76 5×100U -20 2048
产品描述
HieffTM HS Pfu DNA Polymerase在HieffTM Pfu DNA Polymerase(Cat No: 10113ES60)的基础上添加了在常温下能够抑制5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性的两种单克隆抗体,可进行高特异性的热启动(Hot Start)PCR,扩增产物为平端。HieffTM Pfu DNA Polymerase是经过基因工程改造的,新一代超保真DNA聚合酶,具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性,可用于几乎所有PCR反应。其行进性 (processivity)得到了大幅度提升,即使是非常复杂的模板,也能准确快速的完成反应。其错配率是普通Taq酶的1/52,是Pfu酶的1/6;且扩增速度可以达到15秒/kb。
本产品中附带的5× HS Pfu buffer对于简单或复杂模板、短片段或长片段PCR扩增都具有良好的适应性。缓冲液中已经含有10 mM Mg2+ (1×终浓度为2 mM),可以使用产品中提供的DMSO/MgSO4对反应体系进行优化。另外,产品中附带的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。
产品组分
编号
组分
产品编号/规格
10115ES60(100U) 10115ES76(500U)
10115-A 5×HS Pfu buffer(with 10 mM MgSO4) 1.25 ml 1.25 ml×5
10115-B 25 mM MgSO4 1 ml 1 ml×5
10115-C dNTP Mix(10 mM each) 100 μl 100 μl×5
10115-D HieffTM HS Pfu DNA Polymerase(1 U/μl) 100 μl 100 μl×5
10115-E 5×PCR Enhancer 500 μl 500 μl×5
10115-F DMSO 100 μl 100 μl×5
10115-G 10×Loading buffer 1.25 ml 1.25 ml×5
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74 30分钟内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。
运输与保存方法
冰袋(wet ice)运输。收到产品后放到-20 oC保存。
质量控制
核酸外切酶残留检测:10 U本品和0.6 μg λ-Hind在74 oC下孵育1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测:10 U本?和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 oC下孵育1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中,加入2U本品,以ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。
功能检测1:50 μl PCR体系中加入1U本品,以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2:50 μl PCR体系中加入1U本品,以10 ng λDNA为模板扩增30个循环,取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,观察到单一的15 kb条带。

使用方法

1. 反应体系配制:
所有操作请在冰上进行,各组分解冻后请充分摇匀。为了防止HieffTM HS Pfu DNA Polymerase的校对活性降解引物,请将聚合酶最后加入反应体系中。各组分使用完毕后及时放回-20。5×HS Pfu buffer请勿长时间敞口放置。
ddH2O
to 50 μl
5×HS Pfu buffer (with 10 mM MgSO4) 10 μl
25 mM MgSO4a optional
dNTP Mix(10 mM each)b 1 μl
DMSOc optional
5×PCR Enhancerd optional
模板DNAe optional
Forward Primer(10 μM)
μl
Reverse Primer(10 μM) 2 μl
HieffTM HS Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)f 1 μl
注】:a. 对于大多数PCR反应,Mg2+最佳终浓度为1.5-2 mM。体系中已含有终浓度为2 mM Mg2+,如有需要,可用25 mM MgSO4,以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg2+最佳使用浓度。
b. 请勿使用dUTP和带有尿嘧啶的引物或模板。
c. 扩增子GC含量>60%时加入终浓度3%的DMSO有可能会有助于扩增。
d. 推荐仅当扩增子GC含量>60%且优化条件也无法正常扩增时使用;可能会降低保真度
e. 不同模板最佳反应浓度有所不同,下表为50 μl反应体系推荐模板使用量:
模板种类/扩增长度 <1 kb 1 kb~10 kb >10 kb
基因组DNA 50 ng~250 ng 100 ng~300 ng 150 ng~40