DH5α感受态细胞北京同立海源生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: DH5α感受态细胞
英文名称: DH5α Competent Cell
产品货号: TL-6002
产品规格: 10 tubes
试剂级别: 细胞培养级
产品产地: 中国
产品商标: 同立海源
价    格: 询价元
保存与运输: -80℃
现货状态: 大量
产品资料: 资料下载
更新时间: 2019/6/14 11:07:00
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京同立海源生物科技有限公司
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产品详细描述

产品优势
  
    GMP级生产环境
      * 国内唯一同时通过ISO9001、ISO13485质量体系双认证
     


产品详情

DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA 的热击转化。DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株,其φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。使用pUC19质粒检测,转化效率可达10e8,适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。


操作步骤

1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。

3. 42℃热击90秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。

4. 向每个离心管中加入600~800μl无菌的SOCLB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。

5. 根据实验的需求取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOCLB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。

* 注意:

1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200~300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。


注意事项
1. 感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率

2. 转化有步骤均在无菌条件下操作

3. 包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA,供对照试验使用。

 


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