高保真DNA聚合酶上海翊圣生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: 高保真DNA聚合酶
英文名称: Hieff Canace® Gold High Fidelity DNA Polymerase
产品货号: 10148ES10
产品规格: 10 U
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 103.00元
保存与运输: 冰袋运输。-20℃保存,有效期2年。
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/11/24 8:54:00
浏览人数:70
诚信指数:901点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

 Hieff Canace® Gold High Fidelity DNA Polymerase

高保真DNA聚合酶

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶

10148ES10

10 U

103.00

Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶

10148ES60

100 U

683.00

Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶

10148ES76

500 U

2383.00

Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶

10148ES80

1000 U

4583.00

产品描述

Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase,经基因工程改造而成。该酶具有5’3’DNA聚合酶活性和3’5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了热启动因子,极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力,扩增速度达到15 sec/kb,扩增目的片段的长度可长达10 kb。本产品配备了优化缓冲液,添加了PCR增强组分,使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。

产品组分

编号

组分

产品编码/规格

10148ES10

10 U

10148ES60

100 U

10148ES76

500 U

10148ES80

1000 U

10148-A

Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase

(2 U/μL)

5 μL

50 μL

250 μL

250 μL×2

10148-B

2×Canace® Gold PCR buffer(含Mg2+dNTPs

300 μL

1 mL×3

1 mL×15

1 mL×30

产品应用

基因克隆;复杂DNA模板扩增;高通量建库。

活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA为模板/引物,74℃30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1 U

质量控制

核酸外切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和1 μg λDNA –Hind III37℃下孵育4 hDNA的电泳谱带无变化。

核酸内切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和1 μg λDNA37℃温育4 hDNA的电泳谱带无变化。

大肠杆菌残留DNA检测:50 μL体系中,加入2 U本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存,有效期2年。

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


推荐PCR反应体系(冰上配制)

组分

体积

终浓度

ddH2O

to 50 μL

-

2×Canace® Gold PCR buffer (Mg2+dNTPs)

25 μL

DNA模板

适量

-

Primer正向 (10 μM)

2.5 μL

0.5 μM

Primer反向 (10 μM)

2.5 μL

0.5 μM

Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase(2 U/μL)

0.5 μL

1 U/50 μL

【注】: 1试剂使用:使用前要充分解冻混匀。

2聚合酶浓度:推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化,请勿超过2 U/50 μL

3聚合酶添加:为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物,建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。

4Mg2+终浓度体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要,可用50 mM MgCl2,以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。

5GC模板:在体系中加入终浓度为3%DMSO可能有利于扩增。

6不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系)

模板种类

扩增片段1 kb-10 kb

基因组DNA

50 ng-200 ng

质粒或病毒DNA

10 pg-20 ng

cDNA

1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10)

PCR扩增程序:有以下三种程序可选择,优先选择两步法程序。

两步法程序(优先推荐):                           三步法程序(常规程序):

循环步骤

温度

时间

循环数

 

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

98℃

3 min

1

 

预变性

98℃

3 min

1

变性

98℃

10 sec

30-35

 

变性

98℃

10 sec

30-35

延伸

68℃

30 sec/kb

 

退火

60℃

20 sec

终延伸

72℃

5 min

1

 

延伸

72℃

30 sec/kb

 

 

 

 

 

终延伸

72℃

5 min

1

梯度温度退火程序(难扩增基因推荐程序):           *不同扩增程序下的特点:

步骤

温度

时间

循环数

 

程序类型

两步法

三步法

梯度退火

预变性

98℃

3 min

1

 

速度

最快

中等

变性

98℃

10 sec

15,每个循环降低1℃

 

特异性

中等

梯度退火

70-55℃

20 sec

 

PCR产量

中等

最高

中等

延伸

72℃

30 sec/kb

 

检出率

中等

变性

98℃

10 sec

20

 

 

正常退火

55℃

20 sec

 

 

延伸

72℃

30 sec/kb

 

 

终延伸

72℃

5 min

1

 

 

【注】:1预变性温度和时间:推荐温度:98℃,时间:3 min,高GC含量模板5-10 min

2退火温度和时间:推荐温度:60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

3延伸温度和时间:推荐温度:72℃。时间:30 sec/kb,复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb

4扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20℃保存,防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端。

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产品名称

货号

规格

价格(元)

2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液

10149ES03/08

1/5 mL

553/1453

零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒HOT

10909ES20

20 T

625

零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒(不含MCS多克隆酶切位点)

10910ES20

20 T

625

一步法快速克隆试剂盒HOT

10911ES25/62

25/5×25 T

655/2455

多片段一步法快速克隆试剂盒HOT

10912ES10/50

10/5×10 T

457/1967

定点突变试剂盒HOT

11003ES10

10 T

720

多点突变试剂盒HOT

11004ES10

10 T

1228

HB190129

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