嗜衣原体通用染料法荧光定量PCR试剂盒上海沪震实业有限公司

金牌供应商

性能参数

产品名称: 嗜衣原体通用染料法荧光定量PCR试剂盒
英文名称: Chlamydophila spp.
产品货号: HZ14-19300
产品规格: 50次
试剂级别: 分子生物学级
产品产地: 中国/上海
产品商标: HZbscience
价    格: 2490元
保存与运输: 低温运输,-20℃保存,有效期一年
现货状态: 20
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/4/12 14:41:00
浏览人数:0
诚信指数:1092点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海沪震实业有限公司
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上海市杨浦区密云路1018号复旦科技园808室
邮编:
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电话:
021-60345367
传真:
021-31320307
联系人:
陈先生
所在区域:
上海·中国-上海
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产品详细描述

   

嗜衣原体通用染料法荧光定量PCR试剂盒产品及特点 :

聚合酶链式反应(PCR)是体外酶促合成特异DN**段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。本产品就是为满足这一需求根据 PCR 原理开发的产品,它具有下列特点:

1. 一管式操作,用户只需要提供样品即可。

2. 根据大豆热休克蛋白基因保守区域设计引物,能专一性检测出样品中的大豆成分,但不能检测其他非大豆成分。

3. 快速,整个检测过程(按一个样品计)所需时间仅为 2.0 小时。

4. 只需要普通 PCR 仪和凝胶电泳仪,无需配置贵重仪器设备。

5. 对混合样品中大豆成分的检测下限为 0.1%,对样品中大豆成分的核酸检测下限为 1.0ng/µL。

6. 本只能用于科研,足够 50 次 40uL 体系的常规 PCR。

嗜衣原体通用染料法荧光定量PCR试剂盒包装规格及成分

编号

成分

十孔盒包装(去纸托)

试剂一

2×PCR MagicMix

1mL(亮黄盖)

试剂二

源性成分 PCR 引物混合液

100 uL(白盖)

试剂三

源性成分 PCR 阳性对照

50 uL(黄盖)

试剂四

超纯水

1 mL(本色盖)

试剂五

DNA 释放剂试用装

50 次(成分见下)

试剂六

免 DNA 提取试剂溶液 A 成分一

50 uL(白盖)

试剂七

免 DNA 提取试剂溶液 A 成分二

100uL(绿盖)

试剂八

免 DNA 提取试剂溶液 B

400 uL(红盖)

试剂九

使用手册

1 份

运输及保存:低温运输,-20℃保存,有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时,由于其浓度较高,一定要注意不要污染其他试剂和成分。在专门的区域操作。

自备试剂:DNA 模板。

嗜衣原体通用染料法荧光定量PCR试剂盒使用方法

一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

2. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作:

3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液(足够 10 个样品)为例:在一干净塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一,20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水,充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置,但最好在一周内用完,不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液,1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字,配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。

4. 在标记好的 N+2 个离心管中,加入 1-5mg 固体样品(半粒芝麻大小)或 5uL 液体样品待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照,在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。

5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液,确保固体样品被溶液淹埋,如果是液体样品则震荡混匀。

6. 95℃保温 10 分钟。

7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。

二、嗜衣原体通用染料法荧光定量PCR试剂盒 设置 PCR 反应(40 uL 体系)  

8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分,下面以样品数为 1 举例(注意:如果一次使用DNA 释放剂,每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应,两个反应的模板使用量差 10 倍,由此确定用量,以后就用效果的那个模板用量):

成份

样品(用量1

样品(用量2

阳性对照

阴性对照

即用型 PCR Mix 3.0

20 uL

20 uL

20 uL

20 uL

源性 PCR 引物混合液

2 uL

2 uL

2 uL

2 uL

制备的样品

18 uL

2 uL

样品制备阳性对照

不加

不加

2 uL

不加

样品制备阴性对照

不加

不加

不加

2 uL

超纯水

不加

16 uL

16 uL

16 uL

9. 轻柔混匀后上机,按下面参数进行 PCR。

过程

温度

时间

预变性

94

10分钟

PCR 反应

35 循环)

94

30s

60

30s

72

30s

延伸

72

7

10. 电泳检测 PCR 产物。预期的 PCR 产物长度为 216bp。阳性对照必须有此条带出

现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,需要用通用引物(如真核生物专一 PCR 引物,需自备)测试是否有抑制剂或样品是否浓度达到 PCR 的要求,如果通用引物也扩不出来,需要浓缩并再次纯化 DNA 样品,或者更换 DNA 提取方法,直到通用引物能够扩增出预计大小的片段。

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