EZ DNA甲基化试剂盒-Gold北京天漠科技开发有限公司

性能参数

产品名称: EZ DNA甲基化试剂盒-Gold
英文名称: EZ DNA Methylation-Gold Kit
产品货号: D5005
产品规格: 50次
产品产地: 美国
产品商标: ZYMO RESEARCH
价    格: 询价
保存与运输: 常温 快递
现货状态: 现货
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更新时间: 2015-12-30 11:24:00
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京天漠科技开发有限公司
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北京市朝阳区北苑路170号凯旋城E座1809室
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北京·北京
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产品详细描述

 
EZ DNA Methylation-Gold Kit
EZ DNA甲基化试剂盒-Gold
Catalog No. D5005
 
 
Highlights
 
·         在 3 小时内完全转化富含 GC的 DNA.
·         两次加热变性的反应步骤简化了由未甲基化的胞嘧***转化为尿嘧***的过程 .
·         无DNA 沉淀.并且通过柱层析一步完成DNA的纯化和脱硫.
·         洗脱的超纯 DNA 对于一系列的分子生物分析是非常理想的。
 
 
描述
EZ DNA Methylation-Gold KitTM 是我们 EZ DNA Methylation Kit™产品的改进版.  EZ DNA Methylation-Gold KitTM 将 DNA 变性过程和亚硫酸氢盐转变过程转化为一步.此步骤采用温度变性来取代以前方案中使用氢氧化钠的化学变性过程. 经过DNA亚硫酸氢盐转变,试剂盒可大量回收到 DNA .两种试剂盒都是基于在胞嘧***与亚硫酸氢钠之间发生的使胞嘧***转变为尿嘧***的三步反应. EZ DNA Methylation-Gold™ EZ DNA Methylation™ Kits 都采用创新的柱内脱磺酸技术来减少不必要的DNA沉淀步骤以便每次都可以提供给研究人员较好的结果.试剂盒的设计可以减少模版降解和纯化过程中的DNA损失, 并且完全转化未甲基化的胞嘧***.回收的DNA对于PCR扩增、限制性内切酶消化、测序、微阵列等下游分析是很理想的.  下图是 EZ DNA Methylation-Gold Kit™ 所呈现出的结果.
 
 

 
 
 

在经过亚硫酸氢盐处理后的DNA 测序结果. 使用EZ DNA Methylation-Gold Kit™处理的甲基化的CmpG (在 #5核苷酸位点)DNA.回收的DNA通过PCR来扩增并且直接测序.在 #5位置上甲基化的胞嘧***仍然保持完整,当未被甲基化的胞嘧*** (i.e., positions #7, 9, 11, 14 and 15)通过亚硫酸氢盐处理完全转化为尿嘧***时.
 

 
试剂制备
·  CT Conversion Reagent的制备  试剂盒中所提供的CT Conversion Reagent是固体混合物并且一定要在首次使用前制备好.  通过添加 900 µl 水, 50 µl 的 M-Dissolving Buffer, 和 300 µl 的 M-Dilution Buffer 到一管的CT Conversion Reagent中. 在室温下溶解并且震荡10分钟或在摇床上摇动10分钟.  如果看到没有溶解的试剂是很正常的, 因为在溶液中的 CT Conversion Reagent 已经达到饱和状态.在使用之前将 CT Conversion Reagent 溶液在室温 (20°C – 30°C)下避光保存.每管的 CT Conversion Reagent 是针对10次 DNA 处理设计的.为了得到较好的结果, CT Conversion Reagent 应当在制备后立即使用.如果不立刻使用的话, CT Conversion Reagent 溶液可以在–20°C存储1星期.而且在使用之前存储的 CT Conversion Reagent 溶液一定要在室温下解冻并且通过震动或颠倒2分钟来混合. CT Conversion Reagent 对光很敏感,所以要尽量减少在光下的暴露.
                  
Protocol
每次制备的DNA 范围在 500 pg 到 2 µg之间. 最佳量为200-500 ng.
 
1.       在PCR管中添加 130 µl 的 CT Conversion Reagent 到每 20 µl DNA 样品中. 如果 DNA 样品的体积小于 20 µl, 则用水来弥补差量.  通过轻弹试管或移液器操作来混合样品.
For Example: 4 µl DNA 样品, 加入16 µl 水, 130 µl CT Conversion Reagent
Note:  对于 DNA 体积 >20 µl, 就要调整 CT Conversion Reagent的制备过程.  对于每增加 10 µl DNA样品体积来说,水的量就要随之减少  100 µl.  例如, 40 µl DNA 样品, 就要添加 700 µl来制备 CT Conversion Reagent.  DNA 样品的最大体积为每次转化反应50 µl.  不要调整 M-Dissolving BufferM-Dilution Buffer的体积.
 
2.      将样品管放到循环变温器并按以下步骤操作:
 
           (1).   98°C 放置 10 分钟
           (2).   64°C放置2.5 小时
           (3).   4°C 下存储 .
 
3.       添加 600 µl 的 M-Binding Buffer Zymo-Spin IC™ Column 中,并将柱放如试剂盒所提供的Collection Tube中.  
 
4.       装填样品 (从步骤 2)到 Zymo-Spin IC™ Column 含有 M-Binding Buffer.  盖上盖将柱颠倒数次来混合样品.
 
5.       全速 (>10,000 x g)离心 30 秒.  去除流出液.
 
6.       添加 200 µl 的 M-Wash Buffer 到柱中.  全速离心30 秒.
 
7.       添加 200 µl 的 M-Desulphonation Buffer 到柱中并且在室温 (20 °C – 30 °C) 下放置 15-20 分钟.  在培养后, 全速离心 30 秒.
 
8.       添加 200 µl 的 M-Wash Buffer 到柱中.  全速离心30 秒.  再添加 200 µl 的 M-Wash Buffer 并且离心 30 秒.
 
9.       直接添加 10 µl 的 M-Elution Buffer 到柱基质中.  将柱放置在 1.5 ml 的管中.  全速离心来洗脱 DNA. 
 
DNA 可立刻进行分析或储存在低于-20°C 下以备以后使用.  我们建议您对于每次PCR使用 2 – 4 µl洗脱的 DNA.
 
订购信息
产品描述
编号
试剂规格
价格
EZ DNA Methylation-Gold Kit™
D5005
D5006
50 rxns.
200 rxns.
 
EZ-96 DNA Methylation-Gold Kit™
D5007
D5008
2x96 rxns., (2) 96 shallow-well plates
2x96 rxns., (2) 96 deep-well plates
 
 
        
 
Note - ™ 是 Zymo Research 公司的标志.  此产品仅供研究使用并且应当由专业人士来操作.  试剂盒中的部分试剂是有刺激性的,请带好手套和防护眼镜. 请根据实验室的安全守则来进行操作.
 
 
Selected Citations(使用本产品的部分文献):
1. Takahiro Arima, et al. ZAC, LIT1 (KCNQ1OT1) and p57KIP2 (CDKN1C) are
in an imprinted gene network that may play a role in Beckwith–Wiedemann
syndrome. Nucleic Acids Res., May 2005; 33: 2650 - 2660.
2. Hiroyuki Izumi, et al. Frequent silencing of DBC1 is by genetic or epigenetic
mechanisms in non-small cell lung cancers. Hum. Mol. Genet., Apr 2005;
14: 997 - 1007.
3. Siu-hong Chan, et al. Cloning of CviPII nicking and modifi cation system from
chlorella virus NYs-1 and application of Nt.CviPII in random DNA
amplifi cation. Nucleic Acids Res., Nov 2004; 32: 6187 - 6199.
4. Remco van Doorn, et al. Epigenetic Profi ling of Cutaneous T-Cell Lymphoma:
Promoter Hypermethylation of Multiple Tumor Suppressor Genes Including
BCL7a, PTPRG, and p73. J. Clin. Oncol., May 2005; 10.1200
JCO.2005.11.353.
5. Michael T. et al. Regulation of DNA Methyltransferase 1 by the pRb/E2F1
Pathway. Cancer Res., May 2005; 65: 3624 - 3632.
 
The Polymerase Chain Reaction (PCR) process is covered by U.S. Pat. Nos. 4,683,195 and 4,683,202 assigned to Hoffmann-La Roche. Patents pending in other countries. No license under these patents to use the PCR process is conveyed expressly or by implication to the purchaser by the purchase of Zymo Research’s EZ DNA Methylation™ or EZ DNA Methylation-Gold™ Kits. Further information on purchasing licenses to practice the PCR process can be obtained from the director of Licensing at Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404 or at Roche Molecular Systems, Inc., 1145 Atlantic Avenue, Alameda, California 94501.
关键词:甲基化试剂盒 甲基化检测试剂盒 甲基化检测
 
 
 
 
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