hosphate Sensor Assay Kit (磷酸根荧光检测试剂盒)上海雅吉生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: hosphate Sensor Assay Kit (磷酸根荧光检测试剂盒)
英文名称: hosphate Sensor Assay Kit
产品货号: YS29251
产品规格: T25
试剂级别: 细胞培养级
产品产地: 中国
产品商标: 雅吉生物
价    格: 询价元
保存与运输: 室温
现货状态: 1000瓶
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2021/1/25 9:52:00
浏览人数:15
诚信指数:661点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海雅吉生物科技有限公司
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上海·上海
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产品详细描述

Phosphate Sensor Assay Kit (***酸根荧光检测试剂盒),也称***酸根传感器检测试剂盒或Phosphate Fluorescent Assay Kit,是一种采用荧光基团标记的重组***酸根结合蛋白,从而可以超高灵敏度检测溶液中的无机***酸根或ATP酶(ATPase)、GTP酶(GTPase),***酸酶(phosphatase)和***酸二酯酶(phosphodiesterase)等酶活性的荧光检测试剂盒。

本产品对于无机***酸根(PO43-)的检测灵敏度可以低至100nM。不仅适用于直接检测无机***酸根的浓度,也被广泛用于检测能够直接或间接催化产生无机***酸根的ATPase,GTPase,phosphatase和phosphodiesterase等酶的活性。

Phosphate Sensor是大肠杆菌(E.coli)***酸根结合蛋白(phosphate-binding protein) A197C突变体重组蛋白用环境敏感型荧光基团MDCC (N-[2-(1-Maleimidyl)ethyl]-7-(diethylamino)coumarin-3-carboxamide)进行化学标记的产物。该无机***酸根荧光探针(phosphate fluorescent probe)对无机***酸根高度敏感,能和无机***酸根快速并紧密(Kd~0.1μM)结合。无机***酸根的结合会引起该传感器蛋白发生明显的构象变化,并导致荧光强度的明显增强。因此该荧光探针可以用于快速、超高灵敏度对溶液中的无机***酸根进行实时动力学检测。

Phosphate Sensor与无机***酸根结合后荧光信号显著增强。激发光波长为430nm,发射光波长为450nm的条件下,Phosphate Sensor与无机***酸根结合后荧光信号增强最为显著,荧光信号升高约9倍(图1)。

图1. Phosphate Sensor Assay Kit (***酸根荧光检测试剂盒)中Phosphate Sensor结合无机***酸根前后的荧光信号差异。检测体系(20μl): 5μM Phosphate Sensor, 0或1mM Phosphate Standard,1X检测缓冲液。依次将10μl 0或2mM Phosphate Standard和10μl 10μM Phosphate Sensor加入384孔黑板(具体浓度的Phosphate Standard和Phosphate Sensor均由本试剂盒提供的试剂经1X检测缓冲液稀释获得)。采用荧光酶标仪在25℃ 430nm激发光条件下进行不同发射光波长的荧光测定,每组实验体系重复三次并取平均值。当反应体系中不加入无机***酸根时,Phosphate Sensor在430nm激发光条件下的最大发射波长约为474nm;当反应体系中加入无机***酸根时,Phosphate Sensor在430nm激发光条件下的最大发射波长约为465nm (图1A)。当激发光/发射光分别为430nm/450nm时,Phosphate Sensor在无机***酸根结合前后的荧光信号差异最显著(图1B)。

本产品检测无机***酸根的敏感范围约在100nM-5μM之间(图2),比传统的孔雀绿***酸根检测法(Malachite green phosphate assay)敏感约100倍以上。

Phosphate Sensor对溶液中浓度低至100nM的无机***酸根的结合即可导致明显的荧光增强,实测的EC50约为1.7μM (图2),不同检测条件的检测数据会略有差异。

图2. Phosphate Sensor Assay Kit (***酸根荧光检测试剂盒)中Phosphate Sensor结合无机***酸根的标准曲线。检测体系(20μl): 5μM Phosphate Sensor,1X检测缓冲液,0-1mM Phosphate Standard。依次将10μl 0-2mM Phosphate Standard和10μl 10μM Phosphate Sensor加入384孔黑板(具体浓度的Phosphate Standard和Phosphate Sensor均由本试剂盒提供的试剂经1X检测缓冲液稀释获得)。采用荧光酶标仪在25℃激发光/发射光波长分别为430nm/450nm条件下进行荧光测定,每组实验体系重复三次。利用GraphPad Prism软件中的“variable slope”模型[Y=Bottom+Top-Bottom)/(1+10^((LogEC50-X)*HillSlope))]拟合出标准曲线。不同实验条件的检测数据会略有差异,图中数据仅供参考。

用途:无机***酸根浓度的超灵敏度荧光检测,ATP酶(ATPase)、GTP酶(GTPase)、***酸酶(Phosphatase)和***酸二酯酶(Phosphodiesterase)等可以直接或间接催化产生无机***酸根的酶的高灵敏度活性检测。

Phosphate Sensor来源:MDCC荧光标记的E.coli表达的重组蛋白,表达基因为E.coli phoS基因A197C突变体。

本产品在检测过程中操作简单,使用方便,通常10-30个样品可以在30-60分钟内测定完毕。

一个小包装或中包装的本产品,其中分别含有20nmol或100nmol的Phosphate Sensor,如果用于20μl检测体系,通常分别可以进行200或1000次检测。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
S0192S-1 Phosphate Sensor (200μM) 100μl
S0192S-2 10X检测缓冲液 2ml
S0192S-3 Phosphate Standard (10mM) 0.2ml
说明书 1份

 

产品编号 产品名称 包装
S0192M-1 Phosphate Sensor (200μM) 500μl
S0192M-2 10X检测缓冲液 10ml
S0192M-3 Phosphate Standard (10mM) 1ml
说明书 1份

保存条件:

-20℃避光保存,至少一年有效。

注意事项:

由于Phosphate Sensor储存液中含有高浓度甘油,为减小操作误差,建议根据每次实验所需的量预先用1X检测缓冲液将一定量的Phosphate Sensor稀释成10μM或其它合适浓度备用。

使用荧光酶标仪检测时,为避免相邻孔之间的荧光信号干扰,推荐使用孔和孔之间不透光的384孔黑板。

某些表面有涂层的多孔板可能含有无机***酸根,容易干扰检测体系。因此,建议使用表面未加涂层的384孔黑板进行检测。

由于不同荧光检测设备的灵敏度有所差异,实际检测过程中可以根据荧光信号的强弱适当调整检测体系中Phosphate Sensor的终浓度。

检测体系中须注意避免引入气泡,可以在检测之前对检测板进行离心或震荡处理。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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