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cDNA 第一链合成试剂盒上海斯丹赛生物技术有限公司

性能参数

产品名称: cDNA 第一链合成试剂盒
英文名称: cDNA First Strand Synthesis Kit
产品货号: 2501-100
产品规格: 100test/1kit
产品产地: 上海
产品商标: 斯丹赛
价    格: 询价元
保存与运输: 运输条件:-20℃ 保存条件:-20℃
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2015/7/17 10:18:00
浏览人数:549
诚信指数:121点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海斯丹赛生物技术有限公司
地址:
上海市浦东新区哈雷路 998号4号楼
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电话:
021-58959719
传真:
021-58950719
联系人:
市场部
所在区域:
上海·上海
邮件:
公司展台:

产品详细描述

 

RT-PCR实验必需用品

仪器和耗材

试剂

离心机

DEPC(焦碳酸二乙酯)

微量移液器

移液器吸头

RNase free 离心管

电泳缓冲液

水浴装置或金属浴装置

上样缓冲液

电泳及 UV 装置

DNA Marker

 

实验操作Protocol

RT反应

 

a、按以下条件配制RT反应液

 

 

5 x RT Buffer

2 μl

 

dNTP Mixture(10mM)

1 μl

 

Oligo-dT

 

 

或 Random Hexamer Primer **

0.5μl

 

或特异性下游引物

 

 

 

RNase  inhibitor ( 40U / ul )

0.5μl

 

AMV Reverse Transcriptase

0.5μl

 

实验样品  RNA*

x μl

 

RNase free H2O

5.5-x μl

 

总体积

10 μl

 

注:*实验样品RNA体积根据浓度确定,总量小于等于1μgRNA;当实验样品RNA的表达数量较少时,可加至5.5μl,同时在反应体系中相应地减少RNase free H2的量。

 

b、按以下条件进行逆转录反应

 

室温           

10min ) **

42-60 ***           

45min

95 ****                

5min

冰浴             

5min

 

注: ** 对于随机六聚体引物,在室温温育10 分钟后,再进行逆转录反应。

     *** 对于有复杂二级结构的RNA 模板,逆转录温度可适当提高,不可高于60;也 

     可以加模板和引物后70 温育10 分钟再冰浴5min 后继续后续实验逆转录长链 

     RNA> 2kb建议在42左右进行。

     **** 95加热使AMV Reverse Transcriptase失活并阻止其与DNA结合。

 

使用提示

1.  RNA模板可以采用总RNAmRNA

2.  RT实验应避免RNase污染可采用以下措施 

  1  因人的皮肤表面和唾液都RNase因此实验中应戴一次性手套和口罩

  2  RT实验应使用专门的仪器和耗材建议在专门区域操RNA

  3  RT实验相关耗材应使用干热灭菌18060分钟或用0.1DEPC(焦碳

酸二乙酯)水溶液在37处理12小时后在121高压灭菌30分钟

3.  AMV逆转录酶和RNase抑制剂在取用之前应离心后再吸取吸取时动作要 

使用后应尽快放回-20 

4.  dNTP应避免反复冻融以免失效 

5.  引物的选择可根据具体情况Oligo-dT适用于具有PolyA尾的RNA(一般是

真核生物的mRNA)Random Hexamer Primer适用于所有RNA尤其适用于 

有复杂二级结构的RNA特异性引物适用于已知模板序列的RNA 

6.  PCR反应中MgCl2浓度可依据不同条件进行调整当目的片段长度大于2kb  

我们建议增加MgCl2浓度0.5mM间隔梯度增加。

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