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Master Mix (SYBR Green)上海斯丹赛生物技术有限公司

性能参数

产品名称: Master Mix (SYBR Green)
英文名称: Master Mix (SYBR Green)
产品货号: 2601-200
产品规格: 200test/1kit
产品产地: 上海
产品商标: 斯丹赛
价    格: 询价元
保存与运输: 运输条件:-20℃ 保存条件:-20℃
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2015/7/17 10:23:00
浏览人数:1329
诚信指数:121点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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生物在线声明:以上所展示的信息由企业自行提供,内容的真实性、准确性和合法性由发布企业负责。生物在线对此不承担任何保证责任。

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上海斯丹赛生物技术有限公司
地址:
上海市浦东新区哈雷路 998号4号楼
邮编:
电话:
021-58959719
传真:
021-58950719
联系人:
市场部
所在区域:
上海·上海
邮件:
公司展台:

产品详细描述

          本试剂盒是采用核酸扩增技术结合SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂,可以快速正确地对目的基因进行检测、定量。 

本试剂盒提供2×SYBR Green Mix,使用时只需加入引物、模板即可进行Real Time PCR反应,操作非常快捷简单;本试剂盒通过反应液组份的改良和更高品质酶的应用,使该试剂盒具有扩增效率高、特异性强、重复性好、灵敏度高等优点,对高GC序列的反应性和定量性也大大提高。

使用方法

1  取出2×SYBR Green Mix上下轻缓颠倒混匀,在配制前可进行短暂离心,使用混匀器混匀时转速小于1400

2  PCR反应液配制组份:(反应液配制时请在冰上进行)

 

试剂组份

体积(ul)

终浓度

2×SYBR Green Mix

25

PCR Forward Primer 10uM

1

0.2uM

PCR Reverse Primer 10uM

1

0.2uM

Templete DNA<50ng

5

--

ddH2O

18

--

 

Total③ 

50

--

 

① 2×SYBR Green Mix内含PCR buffer、 Mg2+ dNTP mixtureSYBR Green ITaq酶等。 

② 因不同种类的DNA模板中含有的靶基因的拷贝数不同,必要时可进行梯度稀释确定最佳的DNA模板量。 

③ 建议反应液体积为50 ul

3 充分混匀反应液,按45ul分装至各个PCR反应管中。在每个PCR反应管中,各加入5ul模板。加入模板的体积可作适当调整,但不应超过10ul。 

4 将加好模板的PCR反应管混匀后进行短暂离心,以确保所有试剂流到PCR管底部。 

 

 

5  PCR 反应 

Real Time PCR 反应程序设置如下 

         951min 

         9415s

         6015s      40cycles

         7230s

         荧光信号采集设在 72(每循环第三步反应时)

   退火温度可以根据引物的退火温度来调整。

    融解度曲线程序设置如下

         951min

         651min

         9520s步进 0.5/s,;

         301min

 

结果分析与判定

1  将标准品或参照物的浓度输入,选择样点拟合法进行分析,基线(零点调整)根据扩增曲线实际情况选取一段相对平稳(无异常波动)的拐点之前的荧光信号作为基线调整,噪声容限以基线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线(无规则的噪音线)的最高点,然后进行定量分析。也可根据仪器噪音情况另行调整。 

2  分析后记录未知样品的浓度或 Ct 值。 

3  融解曲线分析有自动分析和手动分析两种,根据需要进行选择。分析后记录   

Tm值。 

4  也可以选择利用琼脂糖凝胶电泳检查分析 PCR 产物的特异性。 

 

注意事项

1  在实验前,请详细阅读说明书。 

2  本试剂盒仅供科研使用。 

3  本试剂中含有荧光染料,保存试剂或配制 PCR 反应液时请避光放置。 

4  核酸扩增时容易污染,导致结果不可靠。故要求在进行扩增实验时,严格按照标准 PCR 流程进行。

 

5  试剂盒须在-20℃避光长期保存,避免反复冻融5次以上,否则可能导致试剂性能下降。如果试剂盒在2周内使用完,可在2-8℃避光保存。

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