M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶上海钰博生物科技有限公司

金牌供应商

性能参数

产品名称: M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶
英文名称: M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶
产品货号: 11105YB90
产品规格: 5000U
试剂级别: 分子生物学级
产品产地: 中国/美国
产品商标: 钰博生物/Ybscience
价    格: 询价
保存与运输: RT,避光
现货状态: 80
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/6/10 12:16:00
浏览人数:330
诚信指数:2562点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

 M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶

产品信息

产品名称          

产品编号

浓度

规格

储存

价格(元)

M-MLV (H-) Reverse Transcriptase逆转录酶

11105YB90

200U/μl

5000U

-20 ºC

 

M-MLV (H-) Reverse Transcriptase逆转录酶

11105YB92

200U/μl

10000U

-20 ºC

 

 M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶产品描述

野生型的M-MuLV包含RNase H活性,该活性可催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA,因而在cDNA 第一条链的合成过程中可能会降解RNA/DNA杂合体中的模板RNA,本品为通过基因重组技术得到的点突变型RNase H活性缺失的逆转录酶,即M-MLV (H-) Reverse Transcriptase,与M-MuLV相比,不仅改善了模板RNA可能被降解情况,且具有更强的延伸能力和稳定性,可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建。

本品适用于第一链cDNA合成,cDNA 片段长度最高可达12kb。也可用于低拷贝基因的检测。

产品组分

编号

组分

产品编号及规格

1110590 (5,000U)

1110592 (10,000U)

11105-A

5×Reaction Buffer

250 μl

500 μl

11105-B

M-MLV (H-) Reverse Transcriptase (200 U/μl)

25 μl

50 μl

 M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶运输与保存方法

冰袋(wet ice)运输。收到产品后放到-20 ºC保存。

 M-MLV (H-) Reverse Transcriptase 逆转录酶注意事项

1)为保证反转录成功,建议使用高质量的RNA样品。

2)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染。

3)如果RNA模板GC含量丰富或者具有复杂的二级结构,可以先只加RNA模板、引物和RNase free H2O混匀,65℃变性5min,冰上冷却,短暂离心后加入其他成分继续下面的反转录步骤。

4)为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用方法

1第一条链cDNA合成(以20μl反应体系为例)

1.1 按照表【1】配制反应体系

1 cDNA第一条链合成反应体系表

RNase free ddH2O

to 20 μl

5×Reaction Buffer

4 μl

dNTP Mixture (10 mM each)

1 μl

Oligo(dT)18(0.5μg/μl)

or Random hexamer (0.1μg/μl)

or GSP(Gene Speicific Primer)(2 μM)

1 μl

RNase inhibitor (40 U/μl)

0.5 μl

M-MLV (H-) Reverse Transcriptase

1 μl

模板RNA

Total RNA: 50ng-5μg

mRNA: 5-500ng

1.2 轻轻混匀

若使用Oligo(dT)18或基因特异性引物,42℃孵育50min

若使用Random hexamer25℃孵育10min42℃孵育50min

1.3  65℃加热15min失活M-MLV (H-) Reverse Transcriptase

2 RT-PCR

建议取1/101/5体积(24µl)的反转录产物作为PCR模板。

2.1 按照【表2】配制反应体系表

2 RT-PCR反应体系表

组分

体积

终浓度

cDNA 模板

2μl

依需要调整

Forward Primer (10μM)

1μl

0.2 μM each

Reverse Primer (10μM)

1μl

0.2 μM each

10×Taq Buffer(Mg2+)

5 μl

1×

2.5mM dNTPs

4μl

0.2 mM

Taq DNA Polymerase

0.5μl

2.5units

ddH2O to final volume

50μl

/

 2.2     按下列条件进行PCR反应:

 

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