SYBR Green qPCR Mix广州东盛生物科技有限公司

性能参数

产品名称: SYBR Green qPCR Mix
英文名称: SYBR Green qPCR Mix
产品货号: P2091/P2092
产品规格: 1ml/1mlx5
试剂级别: 生化级
产品产地: Guangzhou China
产品商标: 东盛
价    格: 300/1350元
保存与运输: -20℃
现货状态: 充足
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2017/12/5 9:06:00
浏览人数:452
诚信指数:7点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

SYBR Green qPCR Mix

 

货号

规格

价格

P2091

1 ml(40次,50 μl体系/次)

300

P2092

1 ml×5(200次,50 μl体系/次)

1350

 

产品组分

P2091

2×SYBR Green qPCR Mix      1 ml      1支

超纯水                                     1 ml      1支

 

P2092

2×SYBR Green qPCR Mix    1ml    1支×5

超纯水                                1 ml    1支×5

注: 本产品份体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品,PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。

 

保存条件

  -20℃避光保存2年。

  请勿保存于-70,防止反复冻融导致酶活降低

 

产品说明

    SYBR Green qPCR Mix是2×浓缩的实时定量PCR扩增的预混和溶液,含有Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、缓冲液、酶抗体、SYBR® Green I等扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时,仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时定量PCR,大大简化操作过程,缩短操作时间,降低污染(加样次数减少)。利用特异性的酶抗体封闭低温条件下Taq DNA聚合酶的活性,防止形成非特异性扩增。本产品与绝大多数厂商的实时荧光定量PCR仪兼容,如Applied Biosystems、Eppendorf、Corbett、Bio-Rad和Roche。

Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶,分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb(简单模板)。延伸速度为0.9-1.2 kb/分钟(70-75 ℃)。该酶具有5’→3’聚合酶活性,无3’→5’外切酶活性。

SYBR® Green Ⅰ是一种结合于DNA双螺旋小沟中的双链DNA结合染料。与双链DNA结合后,其荧光大大增强。这一性质使其用于PCR扩增产物的检测非常理想。SYBR® GreenⅠ的最大吸收波长约为497 nm,发射波长最大约为520 nm。在PCR体系中,只有掺入DNA双链的SYBR® GreenⅠ才能发射强荧光信号,而不掺入链中的SYBR® Green Ⅰ染料分子仅有微弱荧光信号背景,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加同步。

 

产品特点

  • 特异性高:热启动功能与优化缓冲液可防止非特异性扩增和形成引物二聚体。
  • 敏感性:   可检测低拷贝模板。
  • 线性范围广:可精确定量9个数量级。
  • 通用性好:几乎兼容所有实时荧光定量PCR仪。
  • 可重复性、使用方便:即用型2×Mix,减少加样错误和反应体系配制时间。

 

产品用途

  • 实时PCR(使用YBR® Green Ⅰ)
  • 实时RT-PCR(使用YBR® Green Ⅰ)

 

质量控制

    相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;功能测试:qPCR分析扩增的特异性、敏感性与可重复性。

 

2×SYBR Green qPCR Mix的组分

100 mM KCl

4 mM MgCl2

400 μM dNTP混合物

0.2 U/μl Taq DNA聚合酶

dd H2O等

 

应用举例

注:以下反应举例为50 μl标准PCR体系,仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化,确定最佳反应条件。

 

反应体系

 λ DNA(2.5 ng/μl)                          1 μl

 Primer 1(10 μM )                          2 μl

 Primer 2(10 μM)                           2 μl

 2×SYBR Green qPCR Mix               25 μl

 dd H2O                                 补足至50 μl

 

反应条件

94℃    4 min

94℃    30s

X ℃    30s

72℃    40s(获取荧光值)

×32-45个循环

 

东盛SYBR® Green qPCR Mix扩增等倍浓度质粒扩增曲线

东盛SYBR® Green qPCR Mix扩增等倍浓度质粒扩增曲线

 

样本分别是10ng、1ng、0.1ng、0.01ng、0.001ng、0.0001ng/μl浓度的质粒

实验仪器:BIO-RAD CFX96

 

备注:

1  建议在冰上配置PCR 反应液后,再放入实时荧光定量PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性扩增,得到良好的PCR结果。

2  因本产品含有SYBR® Green I,使用或保存时避免长时间强光照射。

3  配制反应液的过程中,请用新的枪头、离心管,以免交叉污染。

4  反应体系中引物、模板的用量,请根据实际情况优化。同时,本产品附带的MgCl2方便调整体系镁离子的浓度。

5  本品与ABI产品的使用程序有一定差异,使用时请重新调整程序,达到良好的特异性及灵敏度。

6  模板DNA推荐用量(50 μl PCR反应体系)

    人类基因组DNA       0.1 μg ---1 μg

    λDNA                 0.5 ng---5 ng

    质粒DNA             0.1 ng-10ng

    大肠杆菌DNA         10 ng-100 ng

 

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