Power Green qPCR Mix广州东盛生物科技有限公司

性能参数

产品名称: Power Green qPCR Mix
英文名称: Power Green qPCR Mix
产品货号: P2101/P2102
产品规格: 1ml/1mlx5
试剂级别: 试剂级
产品产地: 广州
产品商标: 东盛生物
价    格: 400/1800元
保存与运输: -20℃避光保存
现货状态: 充足
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2017/12/5 9:06:00
浏览人数:302
诚信指数:7点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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广州东盛生物科技有限公司
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产品详细描述

Power Green qPCR Mix

产品组分

组分

P2101

P2102

Power Green qPCR Mix

1 ml

1 ml×5

超纯水

1 ml

1 ml×5

ROX Reference Dye, 100X

20μl

100μl


●  P2101可进行100次反应(20μl标准PCR反应体系每次使用10μl);

●  P2102可进行500次反应(20μl标准PCR反应体系,每次使用10μl)。

 

质量控制

    相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;功能测试:qPCR分析扩增的特异性、敏感性与可重复性。

 

保存条件

    -20避光保存2年。

产品说明

Power Green qPCR Mix2×浓缩的实时定量PCR扩增的预混合溶液,含有Hotstart Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液、SYBR® Green Ⅰ等扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时,仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时定量PCR。本产品与绝大多数厂商的实时荧光定量PCR仪兼容,如Applied BiosystemsEppendorfCorbettBio-RadRoche

     本产品适用于快速荧光定量PCR扩增,适用范围广,具有高特异性,高效率,高重复性特征,无非特异性扩增,实验结果可信度高。

 Hotstart Taq DNA聚合酶采用了基于核酸适配子 (aptamer) 的抑制剂,不仅使用方便,而且减少了引物二聚体和其他次级产物对反应的干扰。这种基于核酸适配子的抑制剂能够与聚合酶发生可逆结合,当温度低于 45℃ 时强抑制聚合酶活性,因而能够在室温下建立反应。在72℃时TaqDNA聚合酶即能被激活,无需另外的高温温育步骤。采用这种双重热启动Taq DNA聚合酶进行PCR扩增,能够获得更高的扩增效率、特异性。

 应用举例--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

反应体系 

 样本溶液                                100ng

 Primer 110 μM )             0.4μl

 Primer 210 μM)              0.4 μl

Power Green qPCR Mix          10μl

 dd H2O                                      补足至20 μl

 

如果溶解曲线出现杂峰,可以减少Mix用量

特异性反应体系

 样本溶液                                100ng

 Primer 110 μM )              0.4μl

 Primer 210 μM)              0.4 μl

Power Green qPCR Mix           8μl

 dd H2O                                    补足至20 μl

 

如果对痕量模板的检出率低,可以增加Mix用量

高灵敏反应体系

样本溶液                                100ng

 Primer 110 μM )               0.4μl

 Primer 210 μM)              0.4 μl

Power Green qPCR Mix         12μl

 dd H2O                                         补足至20 μl

 反应条件(三步法)

    94     3min

95    15s

Tm -5  15s

72     30s

×40Cyclesdata collection

反应条件(二步法)(Primer Tm60℃)

     94    3min

95    15s

60     30s

×40Cyclesdata collection

注:三步法重复性更好,且适合不同退火温度。

注意事项------------------------------------------------------------------------------

1.Power Green qPCR Mix设定为总反应体积的1/2,其他的反应组分请参照 最优条件进行调整。 最优条件确定后,如需改变反应体系总体积,各个组分按相同比例改变。

2.引物最佳终浓度为0.2-0.6 μM。引物浓度越高,扩增效率越高,但添加量过高则可能引起非特异的扩增而导致实验失败。

3.在进行反应体系配置时,通常除待检样品之外的组份预混成n+x倍(n为样品数,x为分注损耗)的混合液,然后分注到各管,最后在每管中分别加入相应的待检样品液。

4.本产品依赖温度激活DNA聚合酶,低温时抑制酶活性,高温时激活酶活性, 均在极短时间完成。每一步PCR都会有低温抑制高温激活的效果,所以特异性更好。不需要PCR反应前9510min加热激活,使酶活下降,影响PCR扩增效率、定量精度。Aptamer是合成的化学物质,与Taq抗体hotstart法相比不会引入外源DNA污染。

5.模板的添加量通常在100ng以下,不同来源的DNA,最好进行梯度稀释,确定最佳模板量。

 

仪器选择指南

荧光定量仪器

Rox Reference Dye

ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT

Step One™,  and Step One Plus™

High Rox (2%)

ABI 7500 Rox Low  

Stratagene Mx3000P®, Mx3005P™, and Mx4000® 

Low Rox (0.4%)

Rotor-Gene™; DNA Engine Opticon™, Opticon® 2,

and Chromo 4™ Real-Time Detector;

No Rox Mastercycler® ep realplex, Smart Cycler®, Roche LightCycler® 480, Bio-Rad CFX96

No Rox

 

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