Percoll 细胞分离液上海联硕生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: Percoll 细胞分离液
产品货号: 17-0891-01
产品规格: 100ml/1L
产品产地:  Pharmacia
产品商标:  Pharmacia
价    格: 1元
保存与运输: 低温保存
现货状态: 现货
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2018/12/30 15:06:00
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诚信指数:5300点
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上海联硕生物科技有限公司
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产品详细描述

说明:适合分离细胞,亚细胞成分和大病毒(>70S),渗透压均匀,粘度低,可调至生理离子强度和pH,分离条件温和,对细胞无毒性,可以灭菌消毒。
密度:1.13g/ml
储存条件:2-8℃                            

Percoll 细胞分离液 图片

Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞
  (一) 原理
  Percoll是一种包有乙***的硅胶颗粒。渗透压很低(<20mosm/kg H2O), 粘度也很小,可形成高达1.3g/ml密度,采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200~1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percoll扩散常数低,所形成的梯度十分稳定。此外,Percoll不穿透生物膜,对细胞无毒害,因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒,还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。
  (二)操作方法及注意事项
  1.不同浓度(密度)Percoll溶液的制备: 先用9份Percoll与1份8.5% NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压,然后用生理溶液(0.85% NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。
 Percoll浓度(%)  70    60    50    40    30     20
  比重g/ml     1.090     1.077     1.067     1.056     1.043       1.031
    2.不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润,除去多余血清,这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下,使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置,有时相邻两层Percoll比重相差不大时,可将Percoll液放入注射器中,小针头斜面紧贴管壁,任其自然慢慢流下。
    3.装样:样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异,一般加样体积不宜过大,细胞浓度也不可过高,否则会影响细胞的分离和回收。
    4.离心:一般采用离心力为400g,时间20~25min。由于多层Percoll之间密度差别不大,因此离心机加速、降速时要慢,要平稳。
    5.取样:当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时,可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。
  (三)分离纯化细胞举例
  1.富含NK活性大颗粒淋巴细胞(LGL)的纯化:按顺序由下向上逐层加50%、47.5%、45%、42.5%和40%五种不同密度的Percoll,如用10ml试管(或塑料管)分离,每层Percoll约1.2~1.5ml,初步从外周血中分离的PBMC细胞1×108悬于1ml培基中,按要求装样、离心和取样。一般富含NK杀伤活性的LGL细胞位于42.5%与45%Percoll界面以及上下二层的Percoll液中。
    2.纯化淋巴母细胞和除去死细胞:分别叠加50%和30%Percoll液。收取经PHA(或其它抗原、有丝分裂原)刺激PBMC,或含有较高比例异型的PBMC(如肾综合征出血热患者),按要求装样、离心和取样。位于管底的淋巴细胞为小淋巴细胞;两层Percoll之间为淋巴母细胞,纯度和回收率在80%以上,位于30%Percoll表面是死细胞。收获淋巴母细胞可进行表型、结构以及功能的研究。
  (四) 人不同血细胞的漂浮密度
          表   人不同血细胞的漂浮密度
   ──────────────┬──────────────────
   细 胞   漂浮密度    │ 细 胞       漂浮密度
   ──────────────┼──────────────────
   红细胞  1.09-1.11     │淋巴细胞       1.052-1.077
   粒细胞            │ B淋巴细胞      1.062-1.075
   嗜酸性  1.09-1.095     │ T淋巴细胞      1.065-1.077
   嗜中性  1.080-1.085    │ 淋巴母细胞     1.065-1.077
   单核细胞 1.050-1.066    │自然杀伤细胞     1.050-1.070
   血小板  1.030-1.060    │


适合分离细胞,亚细胞成分和大病毒(>70S),渗透压均匀,粘度低,可调至生理离子强度和pH,分离条件温和,对细胞无毒性,可以灭菌消毒。

Percoll分离液是一种经过聚乙***处理过的硅胶颗粒,经过高速离心后可形成连续密度梯度,由于Percoll扩散常数低,所形成的梯度十分稳定。Percoll分离液采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200~1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。此外,Percoll分离液不穿透生物膜,对细胞无毒害,因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒,还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。Percoll常用于分离和传话植物原生质体、核、叶绿体、和线粒体。

Percoll分离液的配置与使用

1、不同浓度(密度)Percoll分离液的制备: 先用9份Percoll分离液与1份8.5% NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压,然后用生理溶液(0.85% NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。

2、不连续密度梯度Percoll层的制备: 先将试管壁用牛血清湿润,除去多余血清,这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下,使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置,有时相邻两层Percoll比重相差不大时,可将Percoll液放入注射器中,小针头斜面紧贴管壁,任其自然慢慢流下。

3、装样:样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异,一般加样体积不宜过大,细胞浓度也不可过高,否则会影响细胞的分离和回收。

4、离心:一般采用离心力为400g,时间20~25min。由于多层Percoll之间密度差别不大,因此离心机加速、降速时要慢,要平稳。

5、取样:当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时,可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。

Percoll细胞分离液的优点

Percoll渗透性低、不穿透细胞、密度高、无毒害,是目前较理想的介质。Percoll密度梯度离心已被多次成功地用于动物细胞及其细胞器的分离,纯化了包括人血液细胞、骨髓细胞、红血球细胞、白血球细胞、淋巴细胞、肝细胞等在内的十余种动物细胞。

Percoll细胞分离液注意事项:

1、Percoll细胞分离液在储存及孵育过程中避免将实际保留在强光中。

2、试剂瓶盖需盖紧,防止蒸发和污染。

 适合分离细胞、亚细胞成分和大病毒(>70s),渗透压均匀,粘度低,可调至生理离子强度和pH,分离条件温和,对细胞无毒性,可以灭菌消毒。密度为1.13g/ml。




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利福平 Rifampicin sigma 250mg
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