大肠杆菌DH10B菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

菌种保藏由于影响因素过多，细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决，因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。      

1. 大肠杆菌DH10B菌种培养试剂的保存：

   血清：-5oC - -20oC 保存，避免反复冻融。

   培养基:  2oC – 8oC避光保存。

   完全培养基: 2oC – 8oC避光保存，并在2周内用完。

   尽量缩短血清和培养基见光的时间

 2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法：

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌DH10B菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide（如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一） 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定，降解比较慢，提高细胞的存活和生长，极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红：

 大肠杆菌DH10B菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，特别是雌激素。为避免固醇类反应，培养细胞尤其是哺乳类细胞时，应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。EC614 Nb2 大鼠淋巴瘤细胞 大鼠 1640 悬浮

EC550 EC3H/10T1/2 小鼠间充质干细胞 小鼠 DMDM 贴壁

EC551 MSECs 小鼠脐带间充质干细胞 小鼠 DMDM 贴壁

EC552 HSEC 人雪旺细胞 人 DMEM 贴壁

EC553 HFLS 人滑膜成纤维细胞 人 DMEM 贴壁

EC1139 S180 小鼠艾氏腹水瘤细胞TECM15 小鼠 1640 悬浮

EC554 HepaRG 人肝癌细胞 人 1640 贴壁

EC633 HUASMEC 人脐动脉平滑肌细胞 人 DMEM 贴壁

EC555 rHSEC-99 大鼠肝星状细胞 大鼠 DMEM 贴壁

EC556 HSEC 小鼠肝星状细胞 小鼠 DMEM 贴壁

EC562 TM4 正常小鼠睾丸Sertoli细胞 小鼠 DMEM 贴壁

EC563 LouECy 人急性T淋巴细胞白血病细胞 人 1640 悬浮

EC567 MPEC-83 小鼠胰腺腺泡细胞 小鼠 1640 贴壁

EC660 IEEC-6 大鼠小肠上皮细胞 人 1640 贴壁

EC647 A204 人横纹肌肉瘤细胞 人 MECECoy’s 5a 贴壁

EC899 M-NFS-60 小鼠髓性白血病淋巴细胞 小鼠 IMDM 悬浮

EC568 RIMEEC 鼠肠粘膜微血管内皮细胞 大鼠 1640 贴壁

EC569 U-138MG 人脑神经胶质瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC570 PEC-3M 人前列腺癌细胞 人 F12K 贴壁

EC763 LAN-1 人神经母细胞瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC571 D283 Med 人脑髓母细胞瘤细胞 人 1640 悬浮

EC661 NECI-H82 人小细胞株肺癌细胞 人 DMEM 贴壁+悬浮

EC634 G361 人黑色素瘤细胞 人 DMEM 贴壁