大肠杆菌ER2529菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

菌种保藏由于影响因素过多，细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决，因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。      

1. 大肠杆菌ER2529菌种培养试剂的保存：

   血清：-5oC - -20oC 保存，避免反复冻融。

   培养基:  2oC – 8oC避光保存。

   完全培养基: 2oC – 8oC避光保存，并在2周内用完。

   尽量缩短血清和培养基见光的时间

 2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法：

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌ER2529菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide（如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一） 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定，降解比较慢，提高细胞的存活和生长，极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红：

 大肠杆菌ER2529菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，特别是雌激素。为避免固醇类反应，培养细胞尤其是哺乳类细胞时，应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。EC658 IOSE-29 人卵巢上皮细胞 人 1640 贴壁

EC619 HFF 人皮肤成纤维细胞 人 DMEM 贴壁

EC653 HemEECs 人血管瘤内皮细胞 人 1640 贴壁

EC659 NHEK 正常人表皮角质形成细胞 人 IMDM 贴壁

EC660 EOMA 小鼠血管内皮瘤细胞 人 1640 贴壁

EC662 HPMEEC 人肺微血管内皮细胞 人 1640 贴壁

EC620 BAEEC 牛主动脉内皮细胞 人 1640 贴壁

EC621 HEConEpiEC 人结膜上皮细胞 人 DMEM 贴壁

EC622 MAEEC 小鼠主动脉内皮细胞 小鼠 1640 贴壁

EC663 HD11 鸡巨噬细胞 鸡 DMEM 贴壁

EC623 RASMEC 大鼠主动脉平滑肌细胞 大鼠 DMEM 贴壁

EC624 Kit225 IL-2依赖的人淋巴T细胞 人 1640 悬浮

EC625 SU-DHL-1 弥漫性组织淋巴瘤细胞 人 1640 悬浮

EC664 U373 人神经胶质瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC665 alpha TEC1 EClone 6 鼠胰岛素瘤胰岛a细胞 小鼠 DMEM 贴壁

EC666 IOSE80 人正常卵巢上皮细胞 人 DMEM 贴壁

EC667 RAOEEC 大鼠血管内皮细胞 大鼠 1640 贴壁

EC668 Walker256 大鼠肝癌细胞 大鼠 DMEM 贴壁

EC669 HPDLF 人牙周膜成纤维细胞 人 DMEM 贴壁

EC670 ECPAE 牛肺血管内皮细胞 牛 1640 贴壁

EC671 ECPA 47 牛肺血管内皮细胞 牛 DMEM 贴壁

EC626 NTera-2 人卵巢畸胎瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC672 NEEC8 人畸胎瘤细胞 人 MECECoy’s 5a 贴壁

EC673 NECECIT 人畸胎瘤细胞 人 EMEM 贴壁

EC627 HSAS3 人皮肤成纤维细胞 人 DMEM 贴壁

EC628 OECI-LY10 弥漫大B细胞淋巴瘤细胞 人 1640 悬浮