大肠杆菌Top10F’菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

菌种保藏由于影响因素过多，细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决，因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。      

1. 大肠杆菌Top10F’菌种培养试剂的保存：

   血清：-5oC - -20oC 保存，避免反复冻融。

   培养基:  2oC – 8oC避光保存。

   完全培养基: 2oC – 8oC避光保存，并在2周内用完。

   尽量缩短血清和培养基见光的时间

 2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法：

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌Top10F’菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide（如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一） 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定，降解比较慢，提高细胞的存活和生长，极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红：

 大肠杆菌Top10F’菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，特别是雌激素。为避免固醇类反应，培养细胞尤其是哺乳类细胞时，应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。EC465 L cell 小鼠皮下结缔组织细胞 小鼠 DMEM 贴壁

EC467 C8-D1A 小鼠小脑星形细胞 小鼠 DMEM 贴壁

EC469 GIST-882 人胃肠道间质瘤细胞 人 McCoy’s 5a 贴壁

EC470 GIST-430 人胃肠道间质瘤细胞 人 McCoy’s 5a 贴壁

EC252 Colon26 小鼠结肠癌细胞 小鼠 1640 贴壁

EC764 LAN-5 人神经母细胞瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC1225 STC-1 小鼠小肠内分泌细胞 小鼠 DMEM 贴壁

EC1378 Y79 人视网膜母细胞瘤细胞 人 1640 贴壁+悬浮

EC203 SW1990 人胰腺癌细胞 人 L15 贴壁

EC1127 RPMI 8226 人多发性骨髓瘤细胞 人 1640 悬浮

EC547 HMrSV5 人腹膜间皮细胞 人 1640 贴壁

EC872 MEG-01 人成巨核细胞白血病细胞 人 1640 悬浮

EC527 CCD-18Co 正常人结肠成纤维细胞 人 EMEM 贴壁

EC707 KGN 人卵巢颗粒细胞 人 DMEM 贴壁

EC501 HCC70 人乳腺导管癌细胞 人 DMEM 贴壁

EC497 C3A 人永生化肝细胞 人 IMDM 贴壁

RK13 兔肾细胞   兔 无

EC1077 QBC939 人胆管癌细胞 人 DMEM 贴壁

EC503 Leydig 猪睾丸间质细胞 猪 DMEM 贴壁

EC138 BPH-1 人前列腺增生细胞 人 1640 贴壁