DuGreen 核酸染料(10,000× 水溶液)

　　DuGreen 核酸染料特点

　　● 无毒性：DuGreen 独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内，艾姆斯氏试验

　　结果也表明，该染料的诱变性远小于EB。

　　● 灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。

　　● 稳定性高：适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶;室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定，耐光性强。

　　● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。

　　● 操作简单：在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需 30 分钟且无需脱色或冲洗 ，即可直接用可见光凝胶透射仪观察。

　　● 适用范围广：可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳;可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。

　　● 与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置完美兼容：适用于使用254nm 激发的紫外凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置。

　　DuGreen 使用方法简介

　　1.胶染法(用法同EB)(推荐方法)

　　(1) 制胶时加入DuGreen 核酸染料。(例如：每50mL 琼脂糖溶液中加入5μL DuGreen 10,000× 储液，以此比例类推)。

　　(2) 按照常规方法进行电泳。

　　注意事项：

　　(1) 此方法染色染料用量相对较少。500 μL染料大约可以做100块 50mL的胶。

　　(2) 由于DuGreen 具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷却。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将DuGreen 储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。DuGreen 兼容所有常用的电泳缓冲溶液。

　　(3) 如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼脂糖浓度;选用更长的凝胶;延长凝胶时间以保证边缘清晰;改进上样技巧或选择泡染法染色。

　　(4) 此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。

　　2.泡染法

　　(1) 按照常规方法进行电泳。

　　(2) 用H₂O将DuGreen 10,000× 储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中，制成3× 染色液。(例如将15μL DuGreen 10,000× 储液和5mL 1M NaCl加到45mL H₂O中)。

　　(3) 将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右。

　　注意事项：

　　(1) 用泡染法染色时，染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。

　　(2) 3× DuGreen 染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。

几种核酸染料比较

　　特别提醒：

　　(1) 如果您使用的是紫外成像仪，请选择DuRed;如果您使用激光成像仪或希望在可见光下观测，请选择 DuGreen。

　　(2) 少数情况下，质粒经某些酶切后的DNA样品会出现拖尾和分辨率降低，建议同时尝试两种染色方法以决定哪种方法更加合适。