Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit 定点突变试剂盒上海翊圣生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit 定点突变试剂盒
英文名称: Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye)
产品货号: 10184ES50
产品规格: 50 T
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 433元
保存与运输: 冰袋运输。
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2020/1/19 13:58:00
浏览人数:31
诚信指数:906点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海翊圣生物科技有限公司
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产品详细描述

 产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 动物组织直接PCR试剂盒

10184ES50

50 T

433.00

Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 动物组织直接PCR试剂盒

10184ES70

200 T

1453.00

产品描述

动物组织直接PCR试剂盒是一款可直接对不同动物组织进行PCR扩增的试剂盒,适应性广、稳定性强、操作简易。

本试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系,可以快速的裂解多种动物组织样品并释放出基因组DNA,如昆虫足翅、鼠尾、鼠趾、动物皮肤和内脏等。裂解产物可以用于DNA提取纯化、也可以直接用于PCR反应、也可以在-20℃或以下温度条件下长期保存备用。

本试剂盒中提供的Tissue Direct PCR Mix (With Dye)具有很强的扩增兼容性,不需要额外采用纯化提取试剂去除裂解产物中的各种残骸杂质,能直接以待测样品裂解液为模板,进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液,包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分,大大简化扩增步骤的操作过程,降低污染几率。

该试剂盒可用于动物基因扩增检测、转基因动物基因型鉴定等。

产品组分

编号

组分

产品编号/规格

储存

10184ES5050 T

10184ES70200 T

10184-A

Lysis Buffer

10 mL

20 mL × 2

室温或4℃

10184-B

Proteases

100 μL

400 μL

-20℃

10184-C

Tissue Direct PCR Mix (With Dye)

500 μL

1 mL×2

-20℃

aLysis Buffer Proteases两种组分配合使用于动物组织裂解;

b2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye) 包含PCR扩增所需要的热启动Taq DNA聚合酶、dNTPMg2+等;已混有溴酚蓝染料作为电泳指示剂, PCR产物可以直接进行电泳。

运输方法

冰袋运输。

保存方法

1. 试剂10184-ALysis Buffer】为动物组织裂解缓冲液,在常温下,可保存12个月。

2. 试剂10184-BProteases】为动物组织裂解剂,使用时请勿长久开盖,建议保存于-20℃,避免反复冻融

3. 试剂10184-CTissue Direct PCR Mix (With Dye),建议保存于-20℃,避免反复冻融。


操作方法

样品基因组DNA释放

1. 在离心管中加入200 μL Lysis Buffer2 μL Proteases,轻轻涡旋混匀;

2. 取约10 mg动物组织,置于上述离心管中,轻轻涡旋混匀。

3. 55℃孵育5-30 min,然后95℃处理10 min

4. 12000 rpm离心5 min

5. 将上清转移至新的离心管,4℃-20℃保存或直接用于PCR扩增。

】:aLysis BufferProteases混合后尽快使用,不宜长期保存;大量样本操作时,可以将Lysis BufferProteases100 μL:1 μL的比例混匀备用。

b)组织应取少量并尽量剪碎,以便裂解反应更顺利进行;鼠尾组织可以取1-5 mm;皮肤内脏等可以取约一粒米大小碎块。

c55℃孵育,一般5 min即可满足多数PCR需求,如鼠尾、鼠耳等组织;若需要的DNA量较大或样品较难裂解,可将时间延长至30 min或更久;组织块不需完全裂解,残余的部分在后续离心步骤中可被除去。

PCR反应鉴定——PCR反应体系

组分

体积(μL

终浓度

2× Tissue Direct PCR Mix(With Dye)

10

Forward Primer (10 μM)

0.5

0.25 μM

Reverse Primer (10 μM)

0.5

0.25 μM

裂解产物(DNA模板) 

1

-

ddH2O

To 20

-

】:各组分使用前应充分混匀。

a模板使用量:建议1-10%总体系。避免超过总体系的20%

b引物终浓度推荐使用0.2-0.25 μM。反应性能较差时,可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度。

c反应体系:推荐使用20 μL,以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

d体系配制:配制好PCR反应体系,置于涡旋仪上涡旋混匀,瞬时离心将反应液集于管底。

e对照反应:建议进行PCR时,设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

PCR反应鉴定——PCR反应条件

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

94℃

5 min

1

变性

94℃

5 sec

35推荐25-40

退火

50-65℃

5 sec

延伸

72℃

5 sec

终延伸

72℃

5 min

1

【注】:a退火温度:请参考引物的理论Tm 值,退火温度可设置低于引物理论值5℃,或通过梯度PCR确定最佳温度;

b延伸时间:需要根据片段的长度来确定,对于1 kb以内的DNA片段,建议延长时间为5 sec;对于1 kb及以上

的片段可以按15 sec/kb设置延伸时间。

注意事项

1. 建议使用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率;

2. 建议扩增片段长度1 kb以内,以便扩增效率最佳;

3. 本试剂盒仅供经过科研训练的实验人员使用,非实验人员或未经相应培训的人员请在监管下使用,勿独自使用;

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防护性措施进行实验操作。


常见问题与解决方法

常见问题

可能原因

解决方法

阳性对照、待测样本均无条带。

PCR反应体系或反应条件不合适。

使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。

PCR试剂保存不当失去活性。

2× PCR Mix应保存于-20℃,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在4℃短时间存放。

引物设计问题。

尝试重新设计引物进行检查。

阳性对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱。

不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。

使用新鲜的试剂。

加入组织裂解液过量。

增大反应体系,或减少裂解液的用量。

样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。

裂解混合液液可在4℃保存2-3天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR

模板加入量不适合。

在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时,可以降模板浓度调节到低于10%的范围。

PCR循环数不足。

适当增加PCR的循环数,推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂,一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。

非特异性扩增

PCR退火温度太低,循环数、引物浓度或模板浓度太高。

增加PCR退火温度,降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。

PCR引物错配。

重新设计PCR引物。

配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。

PCR反应体系的配制在低温下进行,配制完成后尽快进行PCR扩增反应。

阴性对照出现目的条带

操作工具或试剂污染。

实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

样本间交叉污染。

每个取样器只对一个样本使用;或取完一个样本后,将取样器刃口浸入2%的次**钠溶液中,反复涮洗,然后用干净的纸巾擦干残液。

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