Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit上海翊圣生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit
英文名称: Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit
产品货号: 11143ES50
产品规格: 50 T
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 900元
保存与运输: 冰袋运输。-20℃避光储存
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2020/1/19 13:58:00
浏览人数:49
诚信指数:906点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

 Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

促销价(元)

Hifair®  One Step RT-qPCR SYBR Green Kit

11143ES50

50 T

1126.00

900.00

Hifair®  One Step RT-qPCR SYBR Green Kit

11143ES70

200 T

4126.00

3300.00

产品描述

Hifair®  One Step RT-qPCR SYBR Green Kit是以RNA为模板进行定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中,逆转录和定量PCR在同一反应管中进行,简化了实验操作,降低了污染的风险。本试剂盒以RNA为模板,使用基因特异性引物,利用耐热Hifair®  Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA,并以此为模板在UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase作用下,配合优化的缓冲体系能够特异灵敏的对RNA模板进行精确定量。同时Buffer额外添加了有效抑制非特异性PCR扩增的组分和提高扩增能力的促进因子,使定量PCR结果可以在宽广范围内更加真实有效

本试剂盒以Kit形式提供,2×Hifair®  SG buffer包含优化的缓冲体系和dNTPs等,优化了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子,适用于SYBR Green标记的高特异性检测系统此外,Hifair® UH  Enzymes包含比例优Hifair®  Reverse TranscriptaseRNase inhibitorUNICON® HotStart Taq DNA Polymerase等。

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

11143ES5050 T

11143ES70200 T

11143-A

2×Hifair®  SG buffer

1.25 mL

1.25 mL×2

11143-B

Hifair® UH  Enzymes

125 μL

250μL

11143-C

Hieff® 50×High Rox

50 μL

100 μL

11143-D

Hieff® 50×Low Rox

50 μL

100 μL

11143-E

RNase free ddH2O

1.25 mL

1.25 mL×2

【注】SG bufferSYBR Green buffer的简写,UHUNICON-Hifair的简写

适用机型

High Rox适用机型 ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus

Low Rox 适用机型 ABI 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex

Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P

不需要Rox校正的仪器型号

Bio-Rad:CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Eppendorf:Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler2.0,Lightcycler 96;

Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR

运输与保存方式

冰袋运输。

-20避光储存有效期本品避免反复冻融。建议分装保存。

注意事项

1. 实验过程中请使用RNase free耗材。

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

反应体系(以20 μL为例)

组分

体积(μL

终浓度

2×Hifair®  SG buffer

10

Hifair® UH  Enzymes

1

 

Hieff® 50×High Rox or Low Rox

0.4

1×

Forward Primer (10μM)

0.4

0.2 μM

Reverse Primer (10μM)

0.4

0.2 μM

模板 RNA

Total RNA 1pg-1μg 

 

RNA Free H2O

to 20

 

使用前务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

a) 引物浓度通常引物终浓度为0.2 μM,也可以根据情况0.1-1.0 μM之间进行调整。

b) 参比染料Rox的添加,可根据不同仪器型号进行选择,具体可参考【适用机型】。

c) 模板稀释:qPCR灵敏度极高,建议将模板进行稀释使用,控制CT20-30之间适宜。

d) 反应体系推荐使用20 μL50 μL以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

e) 体系配制:请于超净工作台内配制,使用无核酸酶残留的枪头、反应管推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染

标准扩增程序

 

反应阶段

温度

时间

循环数

1

逆转录

42

10 min

1

2

预变性

95

5 min

1

3

扩增反应

95

10 sec

40

60

 30sec

4

熔解曲线

仪器默认设置

1

【注】 a) 逆转录:对于一些极低丰度的基因可以将逆转录时间适当延长至15min

b) 温度:对于含复杂二级结构或高GC含量的RNA模板,可将逆转录温度提高到55,有助于提升灵敏度。

c) 荧光信号采集:不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同,请根据最短时间限制进行设置。

d) 解曲线通常情况下可以使用仪器默认程序。  

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