花生源性成分核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)上海钰博生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: 花生源性成分核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
英文名称: 花生源性成分核酸检测试剂盒
产品货号: YB022022
产品规格: 48T
试剂级别: 分析纯
产品产地: 中国/上海
产品商标: 钰博生物
价    格: 1966元
保存与运输: -20℃
现货状态: 20
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/8/19 17:34:00
浏览人数:7
诚信指数:2562点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

 花生源性成分核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)

花生源性成分核酸检测试剂盒(一管式 PCR-荧光探针法)

◆ 产品说明

物种鉴定系列中的过敏原鉴定试剂,可针对食品中过敏原成分的特异核酸片段进行扩增,通过实时扩

增曲线判定结果。本产品用于糕点、糖果、冰淇淋等食品中过敏原花生成分的检测,检出限为 0.01%。

◆ 产品组成(96 测试

试剂 含量

A-花生源-P 20μL × 8 管× 12 排

NG-P 100μL × 3 支

PG-花生源-P 100μL × 2 支

◆ 适用仪器

ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等实时荧光 PCR 仪。

◆ 自备耗材和仪器

①冰盒;②移液器(0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头;③离心机;④涡旋混匀器;⑤金属浴。

◆ 注意事项

1.本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。

1)第一区:样本制备区。

2)第二区:模板添加区。

3)第三区:扩增及产物分析区。

★ 分区之间最好进行物理性隔离,避免人为因素造成的污染。

2.实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,不同区域独立使用工具,需更换手套和实验服。

3.严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。

4.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心 30

秒,并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。

5.反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。

6.不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。

◆样品处理

参照《SN/T 1961.2-2007 食品中过敏原成分检测方法 第 2 部分:实时荧光 PCR 方法检测花生成分》或其他标

准处理样品,制备的样本保存待用。

称取约 200g 样品,用洁净研钵或合适的粉碎装置将样品粉碎至粉末状。称取 300mg 粉状样品提取 DNA。

样品的采集和制备是过敏原成分鉴别的重要步骤,为防止交叉污染,应使用一次性消耗品,研钵应经 160℃干

烤 2 h,其他不宜干烤或高压处理的器皿应使用 1%次**钠溶液浸泡。

详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。

◆ 实验操作

1.模板制备(样本制备区)

建议使用配套动物基因组 DNA 提取试剂盒,具体过程详见产品说明书。

2.添加模板(模板添加区,放置于冰盒上进行)

请于-20℃条件下保存,有效期 12 个月

SM-022022LⅡ-A02

2

剪下所需测试数的已含有反应液的 PCR 管,放置在室温待解冻后,离心 30 秒后揭开封口膜,向每管反应液

中分别加入 5μL 模板,顺序为 NG、待测样品模板、PG-花生源-P。盖好配套的 PCR 管盖后,涡旋混匀 30s,离心

1min,立即进行 PCR 扩增反应。

3.扩增反应(扩增及产物分析区)

使用荧光定量 PCR 仪,荧光基团选择 FAM,淬灭基团选择 TAMRA。

按下列条件设置扩增反应:

PCR 循环 荧光收集位点

95℃ 10 分钟 1 个循环 —

95℃ 15 秒

45 个循环

60℃ 1 分钟 ※

4.基线和阈值设定

基线范围选择一般在 6-15 个循环,如果有强阳性样本,应根据实际情况调整基线范围。阈值线应超过阴性对

照扩增曲线的最高点,且 Ct 值不出现任何数值。

◆ 结果判定

检测样品无荧光增幅现象,并且阳性对照、阴性对照、提取对照结果正常者,可判定该样品中未检出过敏原花

生成分。

检测样品 Ct 值≤40,曲线有明显的荧光增幅现象,并且阳性对照、阴性对照、提取对照结果正常者,可判定

该样品中检出过敏原花生成分。

检测样品 Ct 值在 40-45 之间,应重做实时荧光 PCR 反应。再次扩增后的结果 Ct 值仍在 40~45 之间,并且阳性

对照、阴性对照、提取对照结果正常者,可判定该样品中检出过敏原花生成分,否则判定该样品中未检出过敏原花

生成分。

两个平行样中只要有一个样品检测为阳性,即可判定该样品中检出过敏原花生成分。

★ NG 反应为平滑直线,PG 反应为“S”型扩增曲线,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技术支持

 

人员联系。

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