小鼠胰岛素酶联免疫检测试剂盒北京索莱宝科技有限公司

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性能参数

产品名称: 小鼠胰岛素酶联免疫检测试剂盒
英文名称: Mouse insulin elisa kit
产品货号: SEKM-0141
产品规格: 96T
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三
产品商标: solarbio
价    格: 3600元
保存与运输: 2-8℃
现货状态: 现货
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/10/10 10:36:00
浏览人数:8
诚信指数:1319点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京索莱宝科技有限公司
地址:
北京市通州区马驹桥镇联东U谷景盛南四街15号85A三层
邮编:
101102
电话:
18435223305
传真:
010-56371281
联系人:
郭倩
所在区域:
北京·北京
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产品详细描述

    品牌: | 货号:SEKM-0141


    中文名称小鼠胰岛素酶联免疫检测试剂盒
    英文名称Mouse insulin elisa kit
    Sample type血清/血浆/细胞培养上清/尿液/组织样本
    Detection Range0.17-5.5 ng/mL
    Sensitivity0.09 ng/mL
    Assay time3.5h

    仅供研究,不用于临床诊断

    背景介绍:

     胰岛素是糖代谢中最主要的***之一。胰腺的ß细胞岛细胞产生胰岛素前体蛋白,前体蛋白被加工成C肽和胰岛素。它们以等摩尔浓度进入血循环中。成熟的胰岛素由A、B两条链组成。这两条链是通过两个二硫键桥接形成有功能的胰岛素分子。血浆葡萄糖浓度的变化是胰岛素产生并分泌的最主要刺激因素,产生的胰岛素具有一些代谢调节作用。其最主要的作用是,将外周血中糖转运到肝脏中贮存起来。一些诸如肝糖生成障碍或在促进血糖升高的***诸如胰高血糖素、***、生长***和皮质醇等作用下促进肝糖分解都可拮抗胰岛素的作用。

     

     

    检测原理

        Solarbio (Solarbio ®)ELISA试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术胰岛素捕获抗体已预包被于酶标板上,当同时加入标本或参考品和HRP耦连的抗小鼠胰岛素抗体时,其中胰岛素的不同位点会与捕获抗体和HRP偶联的抗小鼠胰岛素抗体结合形成夹心复合物,锚定在固相载体板上,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂,若样本中存在胰岛素将会形成免疫复合物,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测,读其450nm处的OD值,胰岛素浓度与OD450值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中OD值,即可算出标本中胰岛素浓度


    注意事项:※※※

    1. 试剂盒应在有效期内使用,请不要使用过期的试剂。

    2. 试剂盒未使用时应保存在2-8冰箱,已复溶未用完的标准品,请丢弃。

    3. 试剂盒使用前在室温恢复30 min且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。

    4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测,且加入试剂的顺序应保持一致。

    5. 为避免交叉污染,请在试验中使用1次性试管,枪头封板膜及洁净塑料容器。.

    6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少,在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶 

    盖上,使用前请离心处理(5-10 S即可),使管壁上的液体集中在管底部,取用时,请用

    移液器小心吹打几次。

    7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液终止液可以通用外,请不要使用其他来源试剂盒内含的试

    代替本试剂盒中的某单个组分。

    8. 为保证结果准确,每次检测均做标准曲线。


    安全提示:

    试剂盒中的终止液为酸性溶液,操作人员在使用时带上手套并注意防护;在操作过程中也要避免试剂接触皮肤和眼睛,如果不慎接触,请用大量清水清洗;检测血液样本及其它体液样本时,请按国家生物实验室安全防护有关管理规定执行。



    自备实验器材(不提供,可代购)

    1. 酶标仪(主波长450nm,参考波长630nm

    2. 高精度移液器及一次性吸头:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl

    3. 洗板机或洗瓶

    4. 37℃

    5. 双蒸水,去离子水,量筒等

    6. 稀释用聚丙烯试管


    样本收集及储存:

    1. 细胞培养上清:

    将细胞培养基移至无菌离心管,在4℃条件下1000×g离心10 min,然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存24小时内检测可放入2-8℃储存),避免反复冻融。

    2. 血清样本:

    室温血液自然凝固20 min后,在4℃条件下1000×g离心10 min,然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存(24小时内检测可放入2-8℃储存),保存过程中如有沉淀,请再次离心,避免反复冻融。

    3. 血浆样本:

    将全血收集到含抗血凝剂的管中,根据标本的实际要求选择EDTA,柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合20 min,在4℃条件下1000×g离心10 min,然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存(24小时内检测可放入2-8℃储存),避免反复冻融

     

    注意:

    血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本,以免影响检测结果如果样本中的靶标物检测浓度高于标准品的最高值,请将样品做适当倍数稀释后检测,建议正式实验前做预实验以确定稀释倍数。


    试剂准备

    1. 试剂回温:首先在实验前30 min试剂盒,待测样本放置于室温,浓缩洗涤液如出现结晶,请放入37℃温浴直到结晶全部溶解

    2. 配制洗涤液:预先计算好稀释后的洗涤液使用体积,然后用双蒸水或去离子水将20浓缩洗涤液稀释成1应用液,未用完的浓缩洗涤液放入4℃冰箱保存。

    3. 标准品梯度稀释加入标准品稀释液1ml至冻干标准品中,静置15分钟待其完全溶解后轻轻混匀(浓度为5.5ng/ml),然后按照以下浓度:5.52.751.3750.6870.3430.1710.0850 ng/ml进行稀释。复溶过的标准品原液(5.5ng/ml未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装,并将其贮存在-20-80℃冰箱,具体如下



    4. 洗涤方法:

    自动洗板:甩尽酶标板孔中液体,在厚迭吸水纸上拍干,注入洗涤液为300ul/,注与吸出间隔为30秒,洗板5次。

    手工洗板:甩尽酶标板孔中液体,在厚迭吸水纸上拍干,用洗瓶加入洗涤液300ul/孔,静止30秒后甩净酶标板孔中液体,在厚迭的吸水纸上拍干,洗板5次。

     

    检测步骤:

    1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数,取出所需板条放置在框架内,暂时用不到板条请放回铝箔袋密封,保存于4℃。

    2.建议设置本底较正孔,即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。

    3.分别将标本或不同浓度标准品(10ul/孔)加入相应孔中,快速加入小鼠胰岛素抗体HRP结合物(100ul/)。用封板胶纸封住反应孔,室温25~28℃孵育120分钟。

    4.洗板5次,且最后一次置厚吸水纸上拍干。

    5.加入显色剂TMB100ul/孔,避光室温25~28℃孵育20分钟。

    6.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。

     


    结果判断

    1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效,复孔的值平均后可作为测量值。

    2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。

    3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

    4.若标本OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。

     

    参数表征

     

    1. 数据及标准曲线

    标准品浓度(ng/ml)

    OD1

    OD2

    平均值

    矫正值

    0

    0.098

    0.096

    0.097

    -

    0.085

    0.153

    0.156

    0.155

    0.058

    0.171

    0.277

    0.265

    0.271

    0.174

    0.343

    0.401

    0.394

    0.398

    0.301

    0.687

    0.534

    0.552

    0.543

    0.446

    1.375

    0.792

    0.775

    0.784

    0.687

    2.75

    1.449

    1.472

    1.461

    1.364

    5.5

    2.33

    2.365

    2.348

    2.251







    本图仅供参考,应以当次试验标准品绘制的标准曲线计算小鼠***的样本含量

     

    2. 灵敏度:

    最低可检测小鼠***浓度达0.1ng/ml

    20个零标准品浓度OD的平均值加上两个标准差,计算相应的可检测浓度。

     

    3. 特异性:

    不与IGF-I、IGF-II、 小鼠 C肽、大鼠 C肽反应,与猪胰岛素、绵羊胰岛素、大鼠胰岛素、牛胰岛素及人胰岛素分别有628%,256%,146%,110%和195%交叉反应。

     

    4. 重复性:

    板内,板间变异系数<10%

     

    5. 回收率:

    在选取的健康小鼠血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的小鼠 ***计算回收率。

    样本类型

    平均回收率(%

    范围(%

    血浆

    93

    86-101

    细胞培养上清

    95

    87-103



    6. 线性稀释

    分别在选取的份健康小鼠血浆和细胞培养上清中加入高浓度小鼠 ***,在标准曲线动力学范围内进行稀释,评估线性。

    稀释比例

    回收率(%)

    血浆

    细胞培养上清

    1:2

    平均回收率(

    96

    102

    范围(%)

    88-105

    92-113

    1:4

    平均回收率(

    98

    103

    范围(%)

    90-107

    94-112



    参考文献:

    1.Korner J, Savontaus E, Chua SC, Jr., Leibel RL, Wardlaw SL (2001) Leptin regulation of Agrp and Npy mRNA in the mousehypothalamus. J Neuroendocrinol 13:959-966

    2.Olsson R and Carlsson PO (2005) Better vascular engraftment and function in pancreatic islets transplanted without prior culture. Diabetologia 48:469-476

    3.Rydtren T and Sandler S (2002) Efficacy of 1400 W, a novel inhibitor of inducible nitric oxide synthase, in preventing interleukin-1beta-induced suppression of pancreatic islet function in vitro and multiple low-dose streptozotocin-induced diabetes in vivo. Eur J Endocrinol 147:543- 551 10

     常见问题及解决方法

    问题

    可能原因

    解决方法

     

     

    高背景或阴性对照值偏高

    洗板不充分

    将洗涤液注入反应孔充分洗涤,彻底拍干孔中液体

    酶结合物过量

    检查酶稀释度,按说明书标识的稀释度稀释

    底物污染

    加底物前检查底物是否为透明无色,勿用变蓝的底物,重新用新的底物试验

    阴性对照孔被阳性对照污染

    注意洗涤时不要把洗液溢出孔外,不使阴阳对照孔液体涟接一起

    不同批次试剂混用

    检查试剂批号,勿用不同批次试剂

     

     

     

    显色信号弱

    试剂过期

    检查试剂盒有效期,请勿用过期试剂

    孵育时间过短

    按说明书中规定的时间孵育

    试剂污染

    检查试剂是否污染,请勿用污染的试剂

    酶标仪滤光片不匹配

    检查酶标仪设置及滤光片是否匹配

    试剂盒平衡不充分

    确保试剂盒试验前平衡至室温

    显色时间不够

    增加底物显色时间

     

     

    无显色信号

    检测抗体、酶、或显色剂漏加

    检查试验操作流程,重复试验

    酶被叠氮钠污染

    使用重新配制的试剂

    试剂添加顺序有误

    检查复核试验添加顺序、流程,重复试验

    标曲佳但样品孔无信号

    样品中靶标物含量低或样品中无靶标物

    设置阳性对照,重复实验

    样品基质效应影响检测

    重新稀释样品后复测

    标曲佳但样品信号偏高

    样品中待检物含量超过标准曲线范围

    重新稀释样品后复测

    边缘效应

    孵育温度不均衡

    孵育时每步均使用新的封板胶纸,避免在环境温度变化大的地方孵育,勿叠放反应板

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