Annexin V-AF647/ 7-AAD荧光双染细胞凋亡检测试剂盒武汉益普生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: Annexin V-AF647/ 7-AAD荧光双染细胞凋亡检测试剂盒
英文名称: Annexin V-AF647/ 7-AAD荧光双染细胞凋亡检测试剂盒
产品货号: P-CA-204
产品规格: 20T
试剂级别: 细胞培养级
产品产地: 武汉
产品商标: Procell
价    格: 询价
保存与运输: 2-8℃
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2020/2/22 16:20:00
浏览人数:12
诚信指数:55点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

       Annexin V-AF647/7-AAD荧光双染细胞凋亡检测试剂盒用于鉴定凋亡和坏死细胞。
       Annexin V是一种钙离子依赖性***脂结合蛋白,与***脂酰丝氨酸PS有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合,将Annexin V标记荧光染料AF647利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。
       7-AAD可与双链DNA特异性结合,并产生强烈的荧光,正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性,7-AAD可进入细胞内对DNA进行染色,与Annexin V搭配使用,可区分处于不同凋亡时期的细胞。
       本试剂盒检测喜树碱诱导的Jurkat细胞凋亡效果如下图所示:

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产品使用说明:
      本试剂盒中Annexin V Binding Buffer(10×)为10×浓缩液,实验前用去离子水稀释成1×工作液。
      例如:取1mL Annexin V Binding Buffer(10×),加入去离子水定容至10mL即可。


实验操作指南步骤:
      1. 细胞按照实验方案进行凋亡诱导,300g离心5min,弃上清,收集细胞,PBS洗涤一次,轻轻重悬细胞并计数。
     
注:本品仅在悬浮培养的细胞中验证,良好的细胞状态是实验的关键。贴壁生长的细胞用于凋亡检测时,可能会因为胰酶消化、吹打等处理导致细胞的坏死或凋亡,对实验结果可能存在不可控的影响,请谨慎处理。
      2. 取1-5×10^5重悬的细胞,300g离心5min,弃上清。用PBS洗涤细胞一次,离心后弃上清,加入500μL稀释的1×Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞。
      3. 细胞悬液中加入5μL的Annexin V-AF647和5μL的7-AAD染色液。
      4. 轻柔涡旋混匀后,室温避光孵育15-20min。
      5. 反应完成后立即上机检测。如不能及时检测,请于冰上避光静置并于1小时内完成检测。


保存条件:
      Annexin V-AF647和7-AAD染色液需要避光保存;7-AAD染色液适当分装后-20℃可保存1年,其他试剂4℃可保存1年。


注意事项:
      1. 为获得最佳的使用效果,请在3-6个月内使用,Annexin V-AF647禁止冷冻保存;

      2. 染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加;
      3. 荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存;
      4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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