GsmartI Taq DNA Polymerase
产品名称： GsmartI Taq DNA Polymerase
英文名称： GsmartI Taq DNA Polymerase
产品编号： GWP101S
产品价格： 0
产品产地： 中国
品牌商标： Genewiz
更新时间： null
使用范围： null
苏州金唯智生物科技有限公司
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产品名称：GsmartI Taq DNA Polymerase
货号：GWP101
浓度：5U/ul
保质期：24个月
保存条件：-20℃
产品内容：
产品组成 | GWP101S | GWP101M | GWP101L |
500u | 1000u | 2500u | |
GsmartI Taq DNAPolymerase | 100 ul | 200 ul | 500ul |
| 10X Taq Buffer | 1ml | 2ml | 5ml |
产品简介：
GsmartI Taq DNAPolymerase是通过将编码Thermus aquaticus DNA polymerase基因的质粒转化到大肠杆菌，经诱导表达后分离纯化获得，其分子量约为94KD。该酶有5’-3’DNA聚合酶活性和5’-3’外切酶活性，但无3’-5’外切酶活性。经检测无外源核酸酶的污染和宿主DNA的残留，扩增效率高，稳定性好，适合用于常规的PCR扩增和菌落PCR。
主要应用：
- PCR快速扩增
- 菌落PCR
- 扩增的DN**段可用于TA克隆
扩增能力：
- 延伸速度：4-6kb/min
- 简单模板，如以λDNA为模板，30秒的延伸时间可以有效扩增3kb片段，4分钟的延伸时间可以有效扩增不超过8kb片段
- 复杂模板，如以人基因组为模板，可以有效扩增不超过3kb片段。
- 扩增产物3’端突出一个“A”碱基，可直接用于T载体克隆
活性单位定义：
75℃ 30min内催化15nmol脱氧核糖核酸生成非酸解物质的酶量定义为一个活性单位，即1U
使用指导：
1. 推荐反应体系：
成分 | 常规PCR | 菌落PCR | |
10× Taq Buffer | 5 ul | 10 ul | 3 ul |
dNTP (10mM each) | 0.5ul | 1 ul | 0.3 ul |
Forward primer✲（20 uM） | 0.5 ul | 1ul | 0.3 ul |
Reverse primer✲（20 uM） | 0.5 ul | 1ul | 0.3 ul |
模板DNA✲✲ | X ul | X ul | 0.5-3ul |
GsmartI Taq DNA Polymerase | 0.5 ul | 1ul | 0.3ul |
灭菌ddH2O | 补水至50ul | 补水至100ul | 补水至30ul |
* 推荐的引物终浓度为0.2uM，但可以根据需要在0.1-0.5uM范围内变化。
*常规PCR模板为质粒、基因组等；菌落PCR模板为菌液，37℃摇床培养1-3h的菌液，模板量以3ul为宜，过夜培养菌液通常0.5ul即能满足PCR需求，过多菌液可能会导致PCR产物电泳挂孔。
2. 将反应管上下颠倒混匀数次，尽量避免产生气泡，最后使用微型离心机离心
3. PCR反应程序：
反应程序 | Temperature, °C | Time | cycles |
预变性 | 95 | 4 min | 1 |
变性 | 94 | 30 s | 25-35/* |
退火 | X℃ | 30 s | |
延伸 | 72 | Y | |
终延伸 | 72 | 5-10 min | 1 |
保存 | 4 | Hold | Hold |
备注：
建议以引物的Tm-5℃作为退火温度；
菌落PCR通常25个循环即可。
延伸时间Y可以参考下表确定：
Target | Y |
0-3k | 6kb/min |
3-8k | 2kb/min |
注意事项：
- Mg2+的终浓度一般推荐为2mM，可以满足常规的PCR扩增要求；对于某些PCR，为获得较好的扩增效果， Mg2+浓度可以在2-4mM范围内调整.
- 50ul体系中，2.5U的酶可以满足绝大多数PCR扩增需求；对于某些PCR如有特殊需要，可以适当增加酶的用量，但不能超过5U.
可能遇到的问题及解决办法：
1) 无扩增产物或扩增效率低
a) 重复一次，排除操作误差
b) 检查引物是否因储存不当降解
c) 模板是否储存时间太长或是反复冻融导致降解；模板GC含量是否过高，过高可在反应体系中添加DMSO或甜菜碱等增强剂
d) 所用的DNA聚合酶是否失活，建议使用一支新的酶重新扩增
e) 延长延伸时间
f) 增加扩增循环数
g) 优化退火温度
2) 出现非特异性扩增或smear带：
a) 引物特异性差，引物与模板有非特异性结合，必要时重新设计引物
b) 模板被污染或降解：重新制备模板
c) 减少酶用量
d) 缩短延伸时间
e) 减少循环数
f) 降低引物浓度