产品组成：

产品说明：

Folin-酚试剂法包括两步反应：第一步是在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物；第二步是此络合物将 Folin 试剂还原，产生深蓝色，颜色深浅与蛋白质含量成正比。定量范围为 5～100μg/ml 蛋白质。 Folin 试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干 扰作用。此外，不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。

操作说明：

工作液制备

 1.根据需要量，取适量 Folin 酚甲试剂 A 和 B 按 50:1 混合，混合后有效期为 24 小时，过期失效。

       2.根据需要量，取适量 BSA 标准品用 PBS 稀释液稀释 10 倍至浓度 0.5mg/mL。

试管法(分光光度计法)

1.标准品按上表加入反应试剂。样品组试管做好标记，加适当稀释的样品200uL，Folin 酚甲试剂2mL，混匀，室温放置 10 分钟；加Folin 酚乙试剂200uL。

2.将上述标准品组合样品组分别混匀，室温放置 30 分钟。分光光度计测定 A650 计算蛋白浓度。

96 孔板法(酶标仪法)

    1.将标准品按 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20uL 加到 96 孔板中，加 PBS 补足到 20uL。

    2.将样品作适当稀释(最好多做几个梯度)，加 20uL 到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点误差比较大，所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2 后。

    3.将配好的 Folin 酚甲试剂每孔加入200uL，轻轻震动，混匀，室温放置 10 分钟。

    4.各孔加入20uL Folin 酚乙试剂，迅速混匀，室温放置 30 分钟。用酶标仪测定 A650 计算蛋白浓度。

注意事项：

     1.Folin酚乙试剂只在酸性条件稳定，故当其加到碱性的铜-蛋白质溶液中时，必须立即混匀，以便在磷钼酸-磷钨酸试剂被破坏前，还原反应即能发生。

     2.为了保证反应进行完全，反应可在25～30℃水浴中进行，反应30min后准时比色。

     3.还原物质干扰本实验。