新型冠状病毒(2019-nCoV)双荧光qRT-PCR试剂盒-PCR/RT-PCR/qPCR-试剂-生物在线
新型冠状病毒(2019-nCoV)双荧光qRT-PCR试剂盒

新型冠状病毒(2019-nCoV)双荧光qRT-PCR试剂盒

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产品名称： 新型冠状病毒(2019-nCoV)双荧光qRT-PCR试剂盒

英文名称： Novel Coronavirus (2019-nCoV) Dual Probes qRT-PCR

产品编号： D8006S

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产品产地： 上海

品牌商标： 雅吉

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上海雅吉生物科技有限公司
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新型冠状病毒(2019-nCoV)双荧光qRT-PCR试剂盒，即Novel Coronavirus (2019-nCoV) Dual Probes qRT-PCR Kit，是基于ORF1ab基因和N基因的双荧光探针的用于新型冠状病毒(2019-nCoV/SARS-CoV-2)核酸检测的试剂盒。本试剂盒经过假病毒验证，可以免RNA抽提而直接用于RNA病毒样品的检测，使用非常便捷。

2019年底由新型冠状病毒引起的肺炎疫情，从2020年初开始在全球大流行，感染病例快速上升，引发全球关注。该病毒被世界卫生组织(WHO)命名为2019-nCoV，被国际病毒分类委员会命名为严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)。由新型冠状病毒导致的疾病，被世界卫生组织正式命名为冠状病毒疾病2019 (Corona Virus Disease 2019, COVID-19），通常称为新型冠状病毒肺炎，简称“新冠肺炎”。
冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征(MERS)、严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病以及新冠肺炎COVID-19。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。
本试剂盒以新型冠状病毒ORF1ab基因和N基因中的保守区为靶点，参考中国疾病预防控制中心提供的新型冠状病毒核酸检测引物和探针序列，并经过优化而研发的新型冠状毒核酸检测试剂盒。每条检测探针的5端标记FAM或VIC荧光基团，3端标记TAMRA或BHQ1淬灭基团。扩增之前探针上的淬灭基团由于空间上的荧光共振能力转移(FRET)而导致荧光基团淬灭。PCR反应时，引物和探针都会退火到目标基因上，随着引物的延伸，Taq酶的5→3外切酶活性会导致结合在目标基因上的探针从5端开始逐渐被降解。探针的荧光基团和淬灭基团被Taq酶切开后，淬灭基团的作用消失，荧光基团就能正常地被激发光所激发而产生荧光。每经过一个PCR循环，就会有更多的荧光基团被释放，荧光强度与新合成的目标片段数量成正比，荧光定量PCR仪可根据检测到的荧光信号绘制出实时扩增曲线，从而实现对新冠状病毒(2019-nCoV)在核酸水平上的检测。
本试剂盒包含了BeyoRT™ M-MLV反转录酶、BeyoFast™ Taq DNA Polymerase、引物、探针、PCR Buffer、dNTPs、稳定剂、Nuclease-free Water和镁离子等所有的通用组分，操作更简单、使用便捷，用户只需自备样品RNA即可。本试剂盒的检测下限为500-1000 copies/ml。本试剂盒用于阳性质粒检测的平均Ct值见下表，检测效果参考图1。
Target 100pg 10pg 1pg 0.1pg 0.01pg 0pg
N-FAM 13.28 16.73 20.02 23.36 26.85 Undetermined
ORF1ab-VIC 13.12 16.41 19.82 23.17 26.73 Undetermined


 

图1.新型冠状病毒(2019-nCoV)双荧光qRT-PCR试剂盒用于阳性质粒的检测效果图。将本试剂盒中的Novel CoV (2019-nCoV) Positive control稀释至每反应中的每个质粒量分别为100、10、1、0. 1、0.01pg，然后用本试剂盒进行双荧光qRT-PCR检测。由于阳性质粒是超螺旋的，其检测灵敏度远低于线性化的质粒，不能直接用超螺旋质粒的检测灵敏度去计算检测下限。实测数据可能会因样品、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
本试剂盒适用于具有FAM和VIC/HEX/JOE检测通道的荧光定量PCR仪，如ABI的7500、7900、StepOne、QuantStudio系列，Roche的LightCycler480、SmartCycler，Bio-Rad的CFX96、Chromo4、Opticon 2、iCycler IQ、iQ5，Qiagen的Rotor Gene 6000，上海宏石SLAN-96P等。
本试剂盒经假病毒验证，可以免RNA抽提而直接用于病毒的核酸检测。本试剂盒经过优化，对含咽拭子、唾液的常规病毒保存液有较好的兼容性；同时，本试剂盒经假病毒模拟咽拭子、唾液样品验证，可以适用于保存于病毒保存液中的RNA病毒样品的直接检测，无须进行RNA的抽提，使用非常便捷，相关结果参考下表。不同数量的新冠病毒N基因慢病毒保存在含咽拭子的TE溶液中，RNAeasy™病毒RNA抽提试剂盒(离心柱式) (R0035S/M/L)提取病毒后或未经抽提直接使用本试剂盒进行qRT-PCR检测。此处的病毒量是指每个PCR反应体系中病毒的IU (Infection Unit)数。注：实际操作时，须根据病毒样本的来源、保存液类型进行一定的验证测试。IU数为具有生物活性的病毒颗粒数，实际病毒的拷贝数可能是IU数的10-1000倍。
 
样本处理方式 病毒RNA抽提试剂盒提取 直接法
病毒量(IU) 400 40 4 400 40 4
Ct值 复孔1 24.58 27.93 32.19 25.39 28.97 32.04
复孔2 25.07 28.27 31.58 25.12 28.68 31.00
复孔3 25.21 28.05 31.73 25.13 28.90 31.31
平均值 24.95 28.09 31.84 25.21 28.85 31.45

如果用于常规的96孔板qRT-PCR检测(建议反应体系为25µl)，本产品小包装D8006S可以进行100次检测，中包装D8006M可进行500次检测；如果用于常规的384孔板qRT-PCR检测(建议反应体系为10µl)，本产品小包装D8006S可以进行250次检测，中包装D8006M可进行1250次检测。

包装清单：
产品编号 产品名称 包装
D8006S-1 Enzyme Mix 250µl
D8006S-2 Reaction Buffer 2ml
D8006S-3 Novel CoV (2019-nCoV) Negative control 200µl
D8006S-4 Novel CoV (2019-nCoV) Positive control 200µl
－ 说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D8006M-1 Enzyme Mix 1.25ml
D8006M-2 Reaction Buffer 10ml
D8006M-3 Novel CoV (2019-nCoV) Negative control 1ml
D8006M-4 Novel CoV (2019-nCoV) Positive control 1ml
－ 说明书 1份
保存条件：

-20℃避光保存，一年有效。尽量避免反复冻融。

注意事项：

本试剂盒并非临床诊断检测试剂盒，检测结果仅供科学研究用途，不得作为临床诊断的依据。但感兴趣的用户可以与我司合作，使用本试剂盒作为原料，研发和申报相应的临床诊断检测试剂盒。

样本的采集、保存及运输条件等都可能影响检测结果，其中任何环节失误或污染都会导致假阴性或假阳性结果。

本试剂盒检测的靶序列为新型冠状病毒(2019-nCoV) ORF1ab基因和N基因的保守区域。但如果病毒在靶序列处发生基因突变，则可能出现假阴性结果。

样本灭活(如56℃、45分钟)很可能会使检测结果的Ct值增加1-2。

Enzyme Mix含有高浓度甘油，粘度高，使用前须将所有液体短暂离心至管底，然后缓慢准确吸取。

使用前须确保Reaction Buffer完全融化，并且上下颠倒混匀至少3次后使用。

经测试，本产品反复冻融10次对使用效果无显著影响。但仍需尽量避免反复冻融本产品，反复冻融可能使产品性能下降。

qPCR检测是超高灵敏度的检测，尽量在标准的PCR实验室中进行检测。PCR反应设置区域须尽量避免各种可能的扩增产物的污染。请勿撕开PCR封板膜或PCR管盖，PCR产物宜密封后按扩增后产物要求处理，以避免超高浓度的PCR产物污染实验环境。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。