Fluo-4钙检测试剂盒 *1% FBS生长培养基*西安百萤生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: Fluo-4钙检测试剂盒 *1% FBS生长培养基*
英文名称: Screen Quest Rhod-4 No Wash Calcium Assay Kit *1% FBS Growth Medium * *10 plates*
产品货号: AAT-36334
产品规格: 1 kit
产品产地: 美国
产品商标: AAT Bioquest
价    格: 电议元
保存与运输: 建议在低于-15℃温度下冷冻保存,要求储存环境干燥并
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2021/2/24 9:07:00
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

 

Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒

货号36334存储条件f/l
规格                      10Plate                  价格                                         
Ex (nm)523Em (nm)551
分子量
溶剂
产品详细介绍
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联系电话:18691576690
               02968064558


简要概述

钙通量测定法是药物发现中筛选G蛋白偶联受体(GPCR)的方法。 Screen Quest Rhod-4 NW钙含量测定试剂盒提供了一种基于荧光的均相测定,用于检测细胞内钙的迁移。Rhod-4是可用于HTS筛选的最亮的红色钙指示剂。一旦进入细胞内,Rhod-4 的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解,产生带负电荷的荧光染料,并留在细胞内部,并且与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时,受体信号释放细胞内钙,这大大增加了Rhod-4的荧光。 Rhod-4 具有长波长,高灵敏度和大于250倍的荧光增强特性(当与钙形成复合物时),使其成为测量细胞钙的理想指标。此Screen Quest Rhod-4 NW钙测定试剂盒提供了一种优化的测定方法,用于检测G蛋白偶联受体(GPCR)和钙通道。该测定可以用96孔或384孔微孔板进行,并易于适应自动化。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒。



产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 准备细胞
  2. 除去生长培养基
  3. 添加Rhod-4 NW染料加载溶液(对于96孔板为100 μL /孔,对于384孔板为25 μL /孔)
  4. 在室温下孵育1小时
  5. 检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度


溶液配制

储备溶液配制

1. Rhod-4 NW储备溶液:将100 μL DMSO加入小瓶Rhod-4 NW(组分A)中并充分混合,避光。 注意:10 μL Rhod-4 NW储备液足以装满一块板。

2.分析缓冲液(1X):a)对于#36330(1个板试剂盒)和#363331(10个板试剂盒),通过将9 mL HHBS(组分C)添加到10XPluronic®F127 Plus(1 mL,组分B)中来制成1X分析缓冲液,并充分混合。b)对于#36332(100板试剂盒),通过向10XPluronic®F127 Plus(10 mL,组分B)中加入90 mL HHBS(未包括)制成1X Assay Buffer。 注意:10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。


工作溶液配制

Rhod-4 NW工作溶液:将20 μL Rhod-4 NW储备溶液加入10 mL 1X分析缓冲液中,并充分混合。 注意:该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。


实验步骤

1.将100 μL /孔(96孔板)或25 μL /孔(384孔板)的Rhod-4 NW染料加载溶液添加到细胞板中。

2.在细胞培养箱中将染料加载板孵育30分钟,然后在室温下再孵育30分钟。 注意:如果测定需要37℃,请立即进行实验,而无需进一步室温孵育。 注意:如果细胞在室温下能长时间正常工作,请在室温下孵育细胞板1-2小时。
 
3.准备并添加HHBS或所需缓冲液的复合板。

4.通过检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度运行钙通量检测。


图示

图1.使用Screen Quest Rhod-4 NW分析试剂盒和Rhod-2 AM在HEK-293细胞中测量了卡巴胆碱剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/ 100 μL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 使用Screen Quest™Rhod-4 NW钙测定试剂盒或100 μL Rhod-2 AM溶液(5 μM)在室温下将细胞与100 μL染料上样溶液孵育1小时。 NOVOstar(BMG Labtech)添加了卡巴胆碱(25μL /孔)以达到最终指示的浓度。 使用Rhod-4 NW的卡巴胆碱的EC50约为0.6 μM。

 

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