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Blood Advanced Direct PCR Kit翌圣生物科技(上海)股份有限公司

银牌供应商

性能参数

产品名称: Blood Advanced Direct PCR Kit
英文名称: Blood Advanced Direct PCR Kit
产品货号: 10188ES20
产品规格: 20 T
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 225元
保存与运输: 干冰运输。-20℃保存,有效期1年。
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2022/9/21 9:39:00
浏览人数:58
诚信指数:2060点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司
地址:
上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元
邮编:
200030
电话:
400-6111-883、021-34615995-8075
传真:
021-34615995-188
联系人:
李自转
所在区域:
上海·浦东新区
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产品详细描述

 

  • 产品信息

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    Blood Advanced Direct PCR Kit

    10188ES20

    20 T

    225

    10188ES50

    50 T

    425

    10188ES60

    100 T

    755

    10188ES76

    500 T

    3165

     

    产品描述

     

            Blood Advanced Direct PCR Kit是一款可直接对全血样本进行PCR扩增而无需进行DNA纯化或样本预处理的试剂盒,兼容含EDTA、肝素、柠檬酸盐等常规抗凝剂的新鲜血液、冷藏(冻)血液及Whatman903®FTA®商用干血渍。试剂盒中含有经过经基因工程改造的DNA Polymerase组合,具有保真性高、对PCR抑制剂耐受性强的特点,2× Hieff® Blood Advanced PCR Buffer中添加强力延伸因子、扩增增强因子以及优化的缓冲体系,能够在快速延伸条件下高效扩增8 kb的基因组片段,对于2 kb以下的片段,设置3-5 sec/kb延伸时间即可完成扩增,从而大幅缩短血液样本的鉴定及检测时间。

           Hieff® Advanced High-Fidelity DNA Polymerase Mix的扩增产物的3’端为平末端,适用于一步法快速克隆及TOPO克隆试剂盒(Yeasen CAT# 10907/10908/10909/10910/10911/10912/10922)。
      试剂盒中提供的引物预混液Positive control primer mix (10 μM each)能够从哺乳动物和大多数脊椎动物的sox21基因上游保守序列中扩增出长度237 bp的片段,可作为阳性对照使用。

     

    产品组分

     

    编号

    名称

    10188ES20

    10188ES50

    10188ES60

    10188ES76

    10188-A

    2× Hieff® Blood Advanced PCR Buffer

    500 μL

    1.25 mL

    2.5 mL

    12.5 mL

    10188-B

    Hieff® Advanced High-Fidelity DNA Polymerase Mix

    20 μL

    50 μL

    100 μL

    500 μL

    10188-C

    Positive control primer mix (10 μM each)

    100 μL

    100 μL

    200 μL

    500 μL

    10188-D

    10× DNA loading buffer

    1 mL

    1 mL

    1 mL

    1 mL × 5

     

    运输与保存方式

     

    干冰运输。-20保存,有效期1年。

     

    适用范围

     

    不同类型的全血样本直接PCR反应。

     

    注意事项


    1. 推荐血液模板使用量为反应总体积的10%50 μL反应体系中加入5 μL全血作为模板,注意避免吸取血液凝块。
    2. 延伸时间10 sec/kb可扩增8 kb以下大部分目的片段,3-5 sec/kb即可扩增大部分2 kb以下片段。若扩增效率较低,可适当延长时间至30 sec/kb
    3. PCR反应结束后,推荐将反应产物于4000 rpm (1000× g) 离心1-3 min以沉淀血细胞碎片,取上清进行下游分析。
    4. 本产品不可直接用于医疗诊断。
    5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


    PCR反应体系a

    组分

    体积

    ddH2O

    to 50 μL

    2× Hieff® Blood Advanced PCR Buffer

    25 μL

    Forward Primer (10 μM) b

    2 μL

    Reverse Primer (10 μM) b

    2 μL

    Hieff® Advanced High-Fidelity DNA Polymerase Mix

    1 μL

    血液样本c

    X

    使用前请充分混匀各组分。

    推荐每条引物的使用终浓度为0.4 μM,过高会导致非特异性扩增。

    最佳全血模板浓度范围为0.5%-20%,推荐使用量为10%作为初始尝试条件,即50 μL反应体系中加入5 μL全血作为模板,注意避免吸取血液凝块。对于贮存在Whatman®滤纸卡上的干血渍,则可取约1 mm2带血渍的圆纸片,无需进行预处理,直接放入PCR反应液中即可进行扩增。


    PCR反应条件

    循环步骤

    温度

    时间

    循环数

    预变性

    95℃

    5 min

    1

    变性

    95℃

    15 sec

    30-35

    退火a

    60℃

    15 sec

    延伸b

    72℃

    3-10 sec/kb

    终延伸

    72℃

    5 min

    1

    退火温度为通用Tm值或低于引物Tm1-2℃。如果扩增产物特异性较差,可以建立退火温度梯度以寻找最佳退火条件。

    延伸时间10 sec/kb可扩增8 kb以下大部分目的片段,3-5 sec/kb即可扩增大部分2 kb以下片段。若扩增效率较低,可适当延长时间至20-30 sec/kb,不应超过60 sec/kb


    PCR产物分析

    PCR反应结束后,推荐将反应产物于4000 rpm (1000× g) 离心1-3 min以沉淀血细胞碎片,取上清进行下游分析。该步骤可消除全血中多种残留成分对电泳检测的干扰,对使用高浓度血液作为模板的PCR产物尤为必要。通常,5 μL/50 μL (10%)反应产物可取30-35 μL上清,3 μL/50 μL (5%)反应产物可取40-45 μL上清。若需对PCR产物进行其它分析,例如酶切等,应将产物稀释2-4倍以降低反应中的盐及其它抑制剂对反应的干扰。


    对照反应

    试剂盒内提供引物预混液Positive Control Primer Mix (10 μM each) 用于阳性对照反应。可从哺乳动物及其他许多脊椎动物的基因组sox 21基因上游序列中扩增出237 bp的片段,该扩增区是一段高度保守的非编码区。
    Primer F: 5- AGCCCTTGGGGASTTGAATTGCTG -3   
    Primer R: 5- GCACTCCAGAGGACAGCRGTGTCAATA -3

     

    常见问题与解决方案

     

    无扩增产物或产量少

    产物呈现高分子量弥散条带

    产物呈现低分子量弥散条带

    检查引物设计,确认引物浓度和纯度

    提高退火温度或设置退火梯度

    电泳前离心取上清

    重复实验,确认体系、程序无误

    延伸时间不应过长

    提高退火温度或设置退火梯度

    增加循环数

    尝试不同的血液用量

    尝试不同的血液用量

    优化退火温度

    减少循环数

    减少循环数

    尝试不同的血液用量

    降低引物浓度

    降低引物浓度

    重新设计引物

     

    重新设计引物

    HB220617

     

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