Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit(Premixed version)
产品名称： Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit(Premixed version)
英文名称： Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit(Premixed version)
产品编号： 12310ES08
产品价格： 3672.00
产品产地： Yeasen
品牌商标： Yeasen
更新时间： 2023-11-03T09:40:01
使用范围： null
| 规格 | 价格 |
| 8 T | 3672.0 |
| 24T | 5563.0 |
| 96T | 29772.0 |
- 联系人 : 李自转
- 地址 : 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元
- 邮编 : 200030
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 139****5640
- 传真 : 021-34615995-188
- 邮箱 : lizizhuan@yeasen.com
产品简介
Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit(Premixed version)是兼容Illumina和MGI双平台的total RNA测序文库构建试剂盒，试剂盒包含RNA片段化试剂，反转录试剂，常规和链特异性ds-cDNA合成试剂，以及文库扩增试剂。可以衔接mRNA纯化试剂盒或rRNA去除试剂盒构建测序文库。二链合成配有两种模块，客户可根据需要进行常规建库或链特异性建库。其中链特异性二链合成模块中将dTTP替换为dUTP，使cDNA第二链中掺入dUTP，而本试剂盒使用的高保真DNA聚合酶无法扩增含尿嘧啶的DNA模板，实现链特异性。本试剂盒各模块Buffer和Enzyme已提前预混，减少加样步骤，使用更为便捷，所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。
产品信息
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货号 |
12310ES08 / 12310ES24 / 12310ES96 |
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规格 |
8 T / 24 T / 96 T |
组分信息
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组分编号 |
组分名称 |
12310ES08 |
12310ES24 |
12310ES96 |
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12310-A |
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Frag/Prime Buffer |
150 μL |
450 μL |
2×900 μL |
|
12310-B |
1st Reaction Module |
64 μL |
192 μL |
768 μL |
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12310-C |
2nd Reaction Module 1(dNTP) |
280 μL |
840 μL |
2×1680 μL |
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12310-D |
2nd Reaction Module 2(dUTP) |
280 μL |
840 μL |
2×1680 μL |
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12310-E |
Ligation Reaction Module |
280 μL |
840 μL |
2×1680 μL |
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12310-F |
2×Super Canace® II High-Fidelity Mix |
200 μL |
600 μL |
2×1200 μL |
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12310-* |
* |
Primer Mix* |
NA |
NA |
NA |
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注：*标注表示该成分不包含在本试剂盒，需要额外配置，本试剂盒组分兼容Illumina和MGI双平台，但需要额外配置专属于Illumina®或者MGI®的primer mix(Cat# 13334 Primer Mix for MGI®以及Cat# 13335 Primer Mix for Illumina®). |
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储存条件
-25~-15℃保存，有效期1年。
使用说明
实验前请仔细阅读：
一、关于接头连接(Adapter Ligation)
1. 本公司可提供Illumina®或者MGI®长接头(Barcoded Adapter)试剂盒和短接头试剂盒，客户可根据实验需求进行选择。
2. 我们建议选用高质量的商业化接头。如客户使用自制接头，请委托具有NGS引物合成经验的公司，并备注需进行严格的防污染控制。此外，进行接头退火操作时，请在超净台完成。每次只操作一种接头，防止交叉污染。
3. 使用接头时，请提前将接头取出放在4°C或冰盒上解冻；在室温操作时，实验室温度最好不要超过25°C，防止接头解链。
4. 建库过程中，接头浓度过高或过低都会导致建库成功率变低。本试剂盒操作方案中，所加入的接头体积固定为5 μL，请根据初始的RNA投入量，参考表1对接头进行稀释。接头稀释液请选择0.1×TE buffer，稀释过的接头可在4°C保存48小时。
表1-1 Input Total RNA量与Illumina®接头使用浓度推荐表
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Input Total RNA |
Illumina® Adapter stock concentration |
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10 ng |
1 μM |
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100 ng |
1.5 μM |
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500 ng |
3 μM |
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≥1 μg |
5 μM |
表1-2 Input Total RNA量与MGI®接头使用浓度推荐表
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Input Total RNA |
MGI® Adapter stock concentration |
|
100–499 ng |
2 μM |
|
500–4000 ng |
5 μM |
*可根据不同类型total RNA样本及投入量，按需求适当调整Adapter使用量
二、关于文库扩增 (Library Amplification)
1. 本试剂盒中的文库扩增组分由本公司第二代高保真DNA聚合酶所组成，在第一代的基础上，大大增强了扩增的均一性，即使是低拷贝的基因，也能进行无偏好性地扩增。
2. 文库扩增步骤需要严格控制扩增循环数。循环数不足，将导致文库产量低；循环数过多，又将导致文库偏好性增加、重复度增加、嵌合产物增加、扩增突变积累等多种不良后果。表2列举了使用本试剂盒进行文库扩增，Input Total RNA 量与相应扩增循环数的推荐。
3. 表2中推荐的循环数可满足绝大多数建库需求，若您的样本质量较差（如降解严重的FFPE样本），可根据实际情况适当增加循环数。mRNA建库时请特别注意，由于不同物种和组织所提取的 Total RNA中，mRNA的含量差异较大，实验中需根据建库起始量、物种类型及样本处理情况适当调整扩增循环数。
表 2 Input Total RNA 量与扩增循环数推荐表*
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Input Total RNA |
Number of cycles |
|
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Non-stranded |
Stranded |
|
|
10 ng |
15 |
15 |
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100 ng |
14 |
14 |
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500 ng |
12 |
13 |
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1 μg |
11 |
12 |
【注】：*由于文库产量不仅与投入量和扩增循环数相关，样本质量、片段化条件、分选条件等都会影响产量。建库过程中请根据实际情况综合考虑，选择最合适的建库条件。
三、DNA磁珠纯化与分选 (Bead-based Clean Up and Size Selection)
1. 建库过程中有多个步骤需要使用DNA纯化磁珠，我们推荐使用Hieff NGS® DNA Selection Beads (Yeasen Cat#12601)或AMPure® XP磁珠(Beckman Cat#A63880)进行DNA纯化和分选。
2. 磁珠使用前应先平衡至室温，否则会导致得率下降、分选效果不佳。
3. 磁珠每次使用前都应充分振荡混匀或使用移液器上下吹打充分混匀。
4. 转移上清时，请勿吸取磁珠，即使微量残留都将影响后续文库质量。
5. 磁珠洗涤使用的80%乙醇应现用现配，否则将影响回收效率。
6. 产物洗脱前应将磁珠置于室温干燥。干燥不充分容易造成无水乙醇残留影响后续反应；过分干燥又会导致磁珠开裂进而降低纯化得率。通常情况下，室温干燥3-5 min足以让磁珠充分干燥。
7. DNA纯化或长度分选产物如需保存，可使用0.1×TE Buffer洗脱，产物于4°C可保存2天，-20°C可保存1个月。
四、关于文库质检 (Library Quality Analysis)
1. 通常情况下，构建好的文库可通过长度分布检测和浓度检测来进行质量评价。
2. 文库浓度检测可使用：基于双链DNA荧光染料的方法，如Qubit®、PicoGreen®等；基于qPCR绝对定量的方法。
3. 推荐使用qPCR方法进行文库浓度检测：Qubit®等基于双链DNA荧光染料的浓度测定方法时，无法有效区分单端连接Adapter的产物、两端均未连接Adapter的产物及其他不完整双链结构产物；qPCR绝对定量基于PCR扩增原理，仅定量样品中两端Adapter完整的文库（即可测序的文库），可排除单端或双端都不连接Adapter的不可测序文库的干扰。
4. 文库浓度检测不可使用：基于光谱检测的方法，如NanoDrop®等。
5. 文库长度分布检测，可通过Agilent Bioanalyzer 2100等基于毛细管电泳或微控流原理的设备进行检测。
五、自备材料 (Other Material)
1. mRNA富集试剂盒：Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit V2 (Yeasen Cat#12629)。
2. rRNA去除试剂盒：Hieff NGS® MaxUp Human rRNA Depletion Kit(rRNA & ITS/ETS)（人/小鼠/大鼠rRNA去除，含ITS/ETS）(Yeasen Cat#12257)或其他rRNA去除试剂盒。
3. RNA纯化磁珠： Hieff NGS® RNA Cleaner (Yeasen Cat#12602)或其他等效产品。
4. DNA纯化磁珠：Hieff NGS® DNA Selection Beads (Yeasen Cat#12601)或AMPure® XP Beads (A63880)或其他等效产品。
5. RNA质控：Agilent 2100 Bioanalyzer RNA 6000 Nano/Pico Chip或其他等效产品。
6. Adapters：Complete Adapter for Illumina®使用（Cat#13519-13520或其他等效产品）或Complete Adapter for MGI®使用（Cat#13360-13362或其他等效产品）。
7. 文库质检：Agilent 2100 Bioanalyzer DNA 1000 Chip/ High Sensitivity Chip或其他等效产品；文库定量试剂。
8. 其他材料：无水乙醇、无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、磁力架、PCR仪等。
六、建库流程图
