M-MLV 逆转录酶 ,Rnase H-,点突变上海美吉生物医药科技有限公司

性能参数

产品名称: M-MLV 逆转录酶 ,Rnase H-,点突变
英文名称: M-MLV Reverse Transcriptase
产品货号: M10511
产品规格: 10000U
产品产地: Mbchem
产品商标: Mbchem
价    格: 360元
保存与运输: -20度
现货状态: 现货优惠
产品资料: 资料下载
更新时间: 2018/12/22 15:07:00
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

      M-MLV 逆转录酶 ,Rnase H-,点突变

M-MLV逆转录酶是一种依赖于RNA和DNA的DNA聚合酶。它可以单链RNA、DNA或RNA-DNA杂合链为模板,以RNA或DNA为引物启动DNA合成。

该酶带有针对RNA-DNA杂合链中RNA的RNase H活性。

本产品来源于带有编码莫洛尼氏鼠白血病病毒(M-MLV)逆转录酶的pol基因片段的E.coli菌株。

 

特点:

· 产量更高,第一链cDNA可达9kb;

· 37时活性最高;

· 可用于掺入修饰过的核苷酸(e.g. Cy3-, Cy5-, rhodamine-, aminoallyl-,fluorescein-labeled nucleotides)标准第一链cDNA的合成

 

使用者需要事先准备:

 · dNTP Mix (10mM)

           · Nuclease-Free Water

           · Primer

           · RNA Templete

 

1.  一个常规的反应需要1ng - 5μg total RNA或1ng - 1μg mRNA,

①RNA变性

按照如下配比将各组分加入到已除酶的微量离心管中:

Oligo(dT)12-18 (10pmol) or 25pmol random

primers or 10 pmole gene-specific primer (GSP)      1 μl

dNTP (10mM)                                  2 μl

Nuclease-Free Water                           11-x μl

RNA (1μg/μl)                                   x μl

65度5min,降温到4度

 

②上述变性后退火反应液14ul中加入以下:

M-MLV Revertase 5X Reaction Buffer               4 μl

RNase inhibitor (Rnasin)                          1 μl

M-MLV Revertase                               1 μl

Total                                     20 μl

2.  混匀各组分并短暂温和离心;

 

3.  (此步使用随机引物时必选)30℃ 温浴10min;

 

4.  接着42℃ 温浴30-60min;

 

5.  95℃ 温浴5min终止反应;(长片段77度15min)

 

6.  4℃ 放置5min。

建议:每50 μl PCR反应容积中,加入2-4 μl 第一链cDNA作为模板。

 

注意

1.       PCR产物>1kb的扩增反应要求去除与cDNA互补的RNA,加入1 μl

 (2 units) RNase H37℃ 温浴20min。

2.       逆转录时添加1M betaine (终浓度) 5% DMSO (终浓度)可以增强高GC含量RNA模板的效率。

 

 

应用

· 第一链cDNA合成

· RT-PCR和实时RT-PCR

· 用于克隆和表达的cDNA合成

· 被标记的cDNA探针检测基因芯片

· DNA标记

· RNA分析中的引物延伸

活力单位定义

一个单位活力定义为,42,以poly(A)-oligo(dT)25作为模板-引物,10min内催化1 nmol脱氧核苷酸[3H]dTTP渗入到酸沉淀物中所需酶量。

质量控制

l  经SDS-PAGE电泳分析,纯度达到95%以上;

l  无DNA内切酶、3’和5’端DNA外切酶及RNA酶的活性。

l  标准反应体系中由RNA ladder(分子量范围从1.2kb到7.5kb)合成cDNA,能够得到单一的全长1.2kb的产物和部分全长7.5kb的产物。

 

   

M10511 (10000U)

M10512 (50000U)

M-MLV Revertase

50μl         (200U/μl)

250μl      (200U/μl)

M-MLV Revertase 5× Reaction Buffer

200μl

1ml

   

360

1440

 

 

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