制作原理

      传统的基因打靶技术制备基因敲除（Knock out）/敲入（Knock in）小鼠是建立在DNA同源重组与胚胎干细胞等技术基础上的分子生物学技术。

      同源重组是指当外源DNA片段与宿主基因组片段同源性高时，同源DNA区部分可与宿主DNA的相应片段发生交换（即同源重组）。

      基因打靶就是通过同源重组技术将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的。基因打靶技术目前已被广泛认为是一种理想的特定修饰与改造生物体遗传物质的最佳方法。尤其是条件性和诱导性基因打靶系统的建立，使得对基因在时间和空间上的靶位修饰更加明确、效果更加精确可靠，该技术的发展已经为发育生物学、分子遗传学、免疫学及医学等学科提供了一个全新的、强有力的研究和治疗手段，并已显示出巨大的应用前景及商业价值。

服务流程

服务周期 

小鼠品系

ES细胞品系：C57BL/6N（black）、C57BL/6N（agouti)、129（agouti）

基因打靶常用小鼠模型

1、完全性基因敲除小鼠

2、条件性基因敲除小鼠

3、基因敲入小鼠

4、人源化小鼠

5、KO First技术制作基因敲除鼠

      完全性基因敲除是通过基因敲除技术，把需要敲除目的基因的所有外显子或几个重要的外显子或者功能区域敲除掉，获得全身所有的组织和细胞中都不表达该基因的小鼠模型。

 
应用
用于研究某个基因（要求该基因非胚胎致死性基因）对全身生理病理的功能。

建系原则与流程

1、嵌合体小鼠鉴定：通过毛色判断嵌合体（黑白相间） ，黑色占的比例越大，嵌合率越高。

2、去除抗性基因 Neo：选择嵌合率高的嵌合体小鼠和Flp deleter小鼠杂交，PCR鉴定，获得去掉打靶载体中的 Neo 基因的F1 代（杂合子）；

3、再挑选一对F1 代小鼠进行自交，通过 PCR 鉴定筛选得到去除Neo的纯合子的 F2 代 KO 小鼠（gene-/-）。

**PCR 鉴定引物设计原则：根据Neo基因前后设计鉴定引物，鉴定Neo基因是否去除。