钠离子通道检测北京爱思益普生物科技股份有限公司

银牌供应商 

技术服务信息

服务名称:钠离子通道检测
服务类别:新药研发外包服务 - 离子通道筛选服务
价格:询价
允许参观:允许参与实验
所在区域:北京.北京
更新时间:2017-4-26 12:00:00
浏览人数:90
诚信指数:294点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京爱思益普生物科技股份有限公司
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北京亦庄经济技术开发区经海三路35号院德上科技园内4幢3层
邮编:
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010-67809840,18611172849
传真:
010-67809840
联系人:
李英骥
所在区域:
北京·北京
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技术服务详细描述

 详细说明

表达各种钠离子通道亚型的稳定细胞系信息如下   

  钠通道稳定表达的HEK293细胞系在含有10% 胎牛血清及1.2mg/ml G418的DMEM培养基中培养,培养温度为37℃,二氧化碳浓度为5%。

  细胞传代:除去旧培养基并用PBS洗一次,然后加入1 ml TrypLE? Express溶液,37°C孵育1分钟。当细胞从皿底脱离,加入5 ml 37°C预热的完全培养基。将细胞悬液用吸管轻轻吹打使聚集的细胞分离。将细胞悬液转移至无菌的离心管中,1000rmp离心5分钟收集细胞。扩增或维持培养,将细胞接种于10厘米细胞培养皿,每个细胞培养皿,接种细胞量为3.5*105 cells(最终体积:10 ml)。

  为维持细胞的电生理活性,细胞密度必须不能超过80%。

  膜片钳检测,实验之前细胞用TrypLE™  Express分离,将3*103 细胞铺到盖玻片上,在24孔板中培养(最终体积:500μl),18个小时后,进实验检测。

电生理检测方法

     用微电极拉制仪(P97,Sutter Instruments)将毛细玻璃管(BF150-86-10,Sutter Instruments)拉制成记录电极。在倒置显微镜(IX71,Olympus)下操纵微电极操纵仪(MP285,Sutter Instruments)将记录电极接触到细胞上,给予负压抽吸,形成GΩ封接。形成GΩ封接后进行快速电容补偿,然后继续给予负压,吸破细胞膜,形成全细胞记录模式。然后进行慢速电容的补偿并记录膜电容及串联电阻。不给予漏电补偿。当全细胞记录的电流稳定后开始给药,每个药物浓度作用至5分钟后检测下一个浓度,在记录期间独立重复检测多个细胞。所有电生理实验均在室温下进行。实验数据由 EPC-10 放大器(HEKA)进行采集并储存于PatchMaster (HEKA)软件中。

 

检测实验的刺激方案:

QQ截图20161220094154.jpg


 

数据质量标准

 

(1) 串联电阻 ≤ 20 MΩ;

(2) 封接电阻 ≥ 1 GΩ;

(3) 起始电流幅度适宜;

(4) 电流没有明显的自发性衰减(5分钟内自发性衰减小于5%);

(5) 在膜电位为-80mV下无明显的漏电流 (漏电流 ≤ 100 pA)。

 

数据分析

首先将每一个药物浓度作用后的电流和空白对照电流标准化(1482294580536515.jpg),然后计算每一个药物浓度对应的抑制率(1-1482294580536515.jpg)。对每一个浓度计算平均数和标准误, 并用以下的方程计算每种化合物的半抑制浓度:1482294955110930.jpg

    用以上方程对剂量依赖效应进行非线性拟合, 其中c代表药物浓度,IC50为的半抑制浓度,h代表希尔系数。曲线拟合以及IC50的计算利用IGOR软件完成。

 

NaV1.1


 

Channel

Nav1.1

Gene

SCN1A

Sources

human

Catalog Ref.

ICE-CHO-Nav1.1 + β1

Expression system

CHO

Method

whole cell patch clamp

Reference inhibitor

TTX (5.6nM±0.8nM)

Distribution

CNS and cardiac myocytes

Related diseases

Pain, Epilepsy, Anxiety, Depression Related, Degenerative Diseases, Dravet syndrome, West syndrome, familial autism

 

 


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NaV1.2

 

Channel

NaV1.2

Gene

SCN2A

Sources

human

Catalog Ref.

ICE-HEK-Nav1.2

Expression system

HEK293

Method

whole cell patch clamp

Reference inhibitor

TTX (11.7±0.783nM)

Target

Pain, Seizure, Epilepsy, Anxiety, Depression Related, Degenerative Diseases

 

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NaV1.3

 

Channel

Nav1.3

Gene

SCN3A

Catalog Ref.

ICE-HEK-Nav1.3

Sources

human

Expression system

HEK293

Method

whole cell patch clamp

Reference inhibitor

TTX (5.0±0.54nM)

Target

Pain, Epilepsy, Anxiety, Depression Related

 


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                                                                                     blob.png


 

NaV1.5

 

Channel

NaV1.5

Gene

SCN5A

Catalog Ref.

ICE-HEK-Nav1.5

Sources

human

Expression system

HEK293

Method

whole cell patch clamp

Reference inhibitor

TTX (1.0μM± 438.7nM)

Target

Brugada syndrome, long QT syndrome, progressive cardiac conduction disease ,dilated cardiomyopathy, sick sinus syndrome, and atrial fibrillation

 

 

 


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                                                                             blob.png

 

NaV1.6


 

Channel

Nav1.6

Gene

SCN8A

Catalog Ref.

ICE-HEK-Nav1.6

Sources

human

Expression system

HEK293

Method

whole cell patch clamp

Reference inhibitor

TTX (1.9±0.302nM)

Target

Epilepsy, Degenerative Diseases,

 


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NaV1.7

 

 

Channel

Nav1.7

Gene

SCN9A

Catalog Ref.

ICE-HEK-Nav1.7

Sources

human

Expression system

HEK293

Method

whole cell patch clamp

Reference inhibitor

TTX (1.3±0.508nM)

Target

Pain, Anxiety, Depression Related, erythromelalgia

 

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                                                                           blob.png    


NaV1.8 


 

Channel

NaV1.8

Gene

SCN10A

Catalog Ref.

ICE-HEK-Nav1.8

Sources

human

Expression system

HEK293

Method

whole cell patch clamp

Reference inhibitor

TTX (2.90±0.803nM)

Target

Pain, Anxiety, Depression Related

 

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                                                                               blob.png               

 

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