CRISPR/Cas9定点突变细胞系的构建南京蓝盾生物科技有限公司

银牌供应商 

技术服务信息

服务名称:CRISPR/Cas9定点突变细胞系的构建
服务类别:其它服务 - 实验室定制服务
价格:10000-30000元
允许参观:允许参与实验
所在区域:江苏.南京
更新时间:2018/10/22 10:00:00
浏览人数:66
诚信指数:55点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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供应商联系卡

南京蓝盾生物科技有限公司
地址:
南京市栖霞区生命科技创新园F7楼6层
邮编:
电话:
18094221815
传真:
025-52806140
联系人:
王赫
所在区域:
江苏·南京
邮件:
公司展台:
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我是3516703734,请问我有什么可以帮到您呢?

技术服务详细描述

 

    服务简介          

根据给定GeneID或DNA序列以及点突变信息,在点突变位置附近设计3个sgRNA,合成正负Oligo DNA,构建载体质粒,通过测序验证载体是否构建成功。根据点突变的信息,构建包含突变位置及2侧各2000bp左右的Donor载体。验证待点突变的细胞的单克隆生长能力、药杀浓度、转染条件、载体效率。完成以上工作后,将最高效率的载体与Donor载体共转染待点突变的细胞。转染后进行药杀,之后通过有限稀释进行单克隆的分选。最终通过测序验证是否得到点突变细胞系。

    技术信息          

1. 基因点突变

Cas9系统使目标区域的基因组断裂,利用基因组自身的修复机制,将外源突变位点(两端包含同源臂)通过同源末端重组的方式与基因组中原位点替换,获得稳定遗传的一种技术。

2. 基因敲入技术特点

2.1 通过将基因点突变的个体或细胞与正常的个体或细胞相比较,研究者可以揭示特定基因的功能。
2.2 在基因组水平上将目标基因修改或变成无效等位基因,遗传背景干净清晰,是研究基因功能的金标准。

3. CRISPR/Cas9技术与RNAi技术的比较

3.1 CRISPR/Cas9技术优势
(1)在基因组水平上编辑目标基因,高度模拟目标模型。
(2)遗传背景干净清晰,多次重复实验结果更稳定。
(3)技术热点高增加文章的影响力。
3.2 RNAi技术的缺点
(1)仅部分抑制该基因的功能。
(2)在转录后(包括翻译)水平上下调基因表达,非基因组水平上的彻底改变!
(3)会出现每次实验间的误差。
(4)非特异性强;脱靶效率高(Smith et al., 2017. Evaluation of RNAi and CRISPR technologies by large-scale gene expression profiling in the Connectivity Map. PLoS Biol 15(11): e2003213. )


     蓝盾优势          

1.特有的检测手段可大大缩短服务周期
2.可同时进行支原体检测以及目标细胞株的STR鉴定

3.若实验未按预期完成,技术费用全免!
4.相邻的10bp内多位点的突变与单一点突变价格相同


      蓝盾服务     

 客户只需提供GeneID——基因分析以及细胞状态评估———构建载体——细胞转染——单克隆筛选——目标基因点突变的细胞株的获得

 


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