核体系酵母文库构建/均一化cDNA文库构建/全长cDNA文库构建/Fosmid文库构建威斯腾生物

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技术服务信息

服务名称:核体系酵母文库构建/均一化cDNA文库构建/全长cDNA文库构建/Fosmid文库构建
服务类别:分子生物学服务 - 文库/载体构建服务
价格:欢迎来电详询023-65316016,023—65316556
允许参观:协商决定
所在区域:重庆.重庆
更新时间:2019/3/26 8:46:00
浏览人数:71
服务商:威斯腾生物
诚信指数:1671点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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威斯腾生物
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4006756758
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023-65316016
联系人:
张老师
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技术服务详细描述

核体系酵母文库构建/均一化cDNA文库构建/全长cDNA文库构建/Fosmid文库构建

核体系酵母文库构建

酵母双杂交(Yeast two hybrid)技术是利用酵母遗传学方法分析蛋白质之间的相互作用,已被广泛应用于蛋白质组学、细胞信号转导和功能基因组学等领域,已成为分子生物学研究领域的重要实验手段。经过不断的完善和发展,不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用,更重要的是还可发现与已知蛋白相互作用的未知蛋白。
推出两套酵母双杂交文库构建体系:
一是SMART体系,在现有酵母双杂交文库构建流程(BD MatchmakerTM library)基础之上加入独特步骤,使文库中高丰度表达基因明显降低,从而使文库丰度均一提高筛选阳性率;
二是Gateway体系,采用Gateway位点特异性重组技术(Cloneminer cDNA library construction kit)构建文库。
应用领域:
检测细胞核内发生互作的蛋白质,基于转录因子的转录激活域AD与DNA结合域BD分别构建融合基因 ,通过激活报告基因表达,探测蛋白互作。
部分物种:人、小鼠、大鼠、对虾、水稻、拟南芥、牡丹、稻飞虱、苹果、油菜、小麦、烟草、银杏、土豆、西瓜、棉花。



均一化cDNA文库构建

均一化cDNA文库是克服基因转录水平上巨大差异给文库的筛选和分析带来障碍的有效措施,有利于研究基因的表达和分析。现在,在构建均一化cDNA文库中至少有两种主要的观点。一种是基于复性动力学的原理,高丰度的cDNA在退火下复性速度快,而低丰度的cDNA复性要很长时间,从而可以通过控制复性时间来降低丰度;另一种是基于基因组DNA在拷贝数上具有相对均一化的性质,通过cDNA和DNA的饱和杂交而降低在文库中高拷贝存在的cDNA的丰度。我们主要通过第一种方法实现均一化,以达到降低基因间拷贝数差异,有助于低拷贝基因的筛选。

操作流程

  • RNA提取
  • mRNA分离
  • cDNA合成与均一化处理
  • cDNA长度分级
  • 分级后的cDNA与目的载体的all-direct重组
  • 重组产物电转化

均一化cDNA文库的鉴定
检测库容量(总CFU);随机挑取32个克隆子,PCR方法检测平均插入片段大小;抽提均一化cDNA文库的混合质粒(大抽),qPCR检测均一化前后两个文库总质粒中两个看家基因的表达量差异,以判断均一化的效果。

送样要求

针对每个文库,客户需提供200ug以上的RNA或2g以上的组织样本。

结果提供

我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),随机克隆子的PCR鉴定图谱,文库构建报告。


全长cDNA文库构建

我们提供高全长比例的文库构建服务,全长比例可以高达85%以上。

普通全长cDNA文库构建

操作流程

  • 客户样品QC,Total RNA的提取。
  • mRNA的分离。
  • 采用CAP Trapper法进行全长mRNA的富集。
  • mRNA为模板进行cDNA双链的合成。
  • 对合成的cDNA双链进行分级纯化。
  • 将分级纯化的cDNA与载体进行all-direct重组反应。
  • 将重组产物转化DH10B感受态细胞。
  • cDNA文库的QC。检测文库库容量;每个文库随机挑取32个克隆子,PCR检测检测平均插入片段大小,阳性率; 随机挑取24个克隆进行正向测序,通过NCBI的BLSTAX分析全长率。

送样要求

针对每个文库,客户需提供至少能提取500ug总RNA的样本,或者至少500ug的总RNA。

结果提供

我们提供构建好的cDNA文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),随机克隆子的PCR鉴定图谱,24个克隆正向测序报告,文库构建报告。


Fosmid文库构建

提供高质量,高库容量的Fosmid文库构建服务

操作流程

  • 样本的QC
  • 高质量基因组DNA的提取,基因组DNA的打断处理
  • 打断后的DNA连接到载体
  • 连接产物的包装和侵染大肠杆菌细胞
  • fosmid文库的检测:检测库容量(总CFU);随机挑取16个克隆子,抽提质粒,酶切检测插入片段大小与阳性率。
结果提供

我们提供构建好的fosmid文库的甘油菌液(含20%甘油的LB培养基),随机克隆子的质粒酶切鉴定电泳图,文库构建报告。


威斯腾实验服务流程



 

威斯腾生物服务项目


分子生物学检测蛋白质与免疫学动物实验
实时荧光定量PCR单克隆抗体制备帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP多克隆抗体制备抑郁症动物模型
ELISA(酶联免疫吸附法)技术Western-blot 实验服务脊髓损伤模型
生化指标检测蛋白双向电泳实验服务脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测原核蛋白表达纯化骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀(ChIP真核蛋白表达纯化心肌缺血模型
GST pull DownITRAQ定量蛋白质组学心力衰竭模型
SLAC蛋白组学肺动脉高血压动物模型
高血压模型
病毒包装实验课题整体外包粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化整体课题外包大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化细胞整体实验外包慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化动物整体实验外包过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化肺炎大鼠模型
肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片原代细胞培养肝纤维化模型
细胞因子芯片骨髓间充质干细胞培养胆结石模型
BioPlex悬浮芯片脂肪干细胞培养急性胰腺炎模型
生长因子芯片心肌成纤维细胞培养急性肾衰竭模型
炎症因子芯片软骨细胞培养体内血栓模型
血管生成因子芯片血管内皮细胞培养关节炎模型
凋亡因子芯片神经元细胞培养I型和II型糖尿病模型
趋化因子芯片内皮组细胞原代培养裸鼠成瘤
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片基因编辑动物
电生理相关服务动物整体实验服务
膜片钳实验
细胞生物学检测高通量测序代谢组学
细胞原代培养mRNA测序气相色谱GC/MS
MTT检测LncRNA测序液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测全基因组测序核磁共震NMR
细胞周期检测RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验外显子测序影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭16s扩增子测序Micro-CT
流式分选Small RNA测序小动物活体成像
CCK8/XTT检测宏基因组测序核磁共振
台盼蓝检测细胞活性单细胞测序PET-CT
药物筛选细胞学实验circleRNA测序
细胞粘附性检测甲基化测序基因编辑动物
细胞划痕实验条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验
病理检测CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入基因芯片
扫描电镜基因定点突变细胞系LncRNA芯片
透射电镜单基因敲除细胞系miRNA芯片
HE染色多基因敲除细胞系mRNA芯片
免疫组化目的基因敲入细胞系甲基化芯片(限人和小鼠来源样本)
Tunel(原位末端凋亡法)检测报告基因敲入细胞系SNP芯片(限人和小鼠来源样本)
激光共聚焦miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光
Masson染色CRISPR/Cas9动物敲除/敲入科研设计指导&文章评估/润色
原位杂交基因敲除大鼠/小鼠科研文献论著翻译
荧光原位杂交基因敲入大鼠/小鼠论文翻译润色服务
特殊染色(PSA、茜素红、阿尔新蓝等)临床实验/科研实验设计方案指导
行为学检测药物筛选服务项目药效学评价
旷场实验高通量自动药物筛选平台抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测细胞高内涵药物筛选平台心血管系统药物药效学评价
动物跑台检测蛋白质组学靶标研发平台泌尿系统药物药效学评价
强迫游泳分子药理研究平台内分泌系统药物药效学评价
生物膜片钳药物筛选平台抗炎免疫药物药效学评价
常规药物体外筛选

 

【本平台合作项目】

分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除&敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!

【全国免费热线】400-675-6758

【电话】023-65316016,023-65316556

【邮箱】china-western@163.com

【官网网址】www.cqwestern.com

【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园D栋2楼

 

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