TA克隆基尔顿生物科技(上海)有限公司

银牌供应商 

技术服务信息

服务名称:TA克隆
服务类别:分子生物学服务 - 分子生物学整体服务
价格:询价
允许参观:允许参与实验
所在区域:上海.上海
更新时间:2019/9/20 15:45:00
浏览人数:152
诚信指数:199点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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基尔顿生物科技(上海)有限公司
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上海市长江南路180号长江软件园B区B638室
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传真:
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联系人:
张经理
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上海·上海
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技术服务详细描述

 TA克隆方法(TA Cloning):把PCR片断与一个具有3-T突出的载体DNA连接起来的方法。因为PCR反应中所适用的聚合酶具有末端转移的活性,通常在3加上A。例如:Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能,PCR反应时在每条PCR扩增产物的3端自动添加一个3-A突出端。只有用经过特殊处理的具有3-T突出末端的DNA的片断才能通过T/A配对进行连接。

通过PCR的方法扩增目的基因片断的过程中,由于往往不清楚目的基因的DNA序列,获得的目的片断通常需要通过TA克隆的方法,重组到T-载体中,通过序列测定清楚DNA序列。由于在PCR过程中,使用的DNA聚合酶不同,往往分为2种情况:(1)使用不同的Taq酶,在PCR扩增循环结束后,加上72℃ 10分钟一个过程,Taq酶可以在扩增产物的3末端加上A,因此PCR产物回收纯化后可以和T载体直接连接。(2)使用高保真的DNA聚合酶,如pfu酶,由于其不能在扩增产物的3末端加上A,得到的DNA序列为钝端,因此,需要在回收纯化后进行加A的过程,通常是以PCR回收产物为模板,加上一定量的普通Taq酶和反应液,加入dATP(或dNTP),72℃10分钟,然后将加A产物直接用于TA连接。

TA克隆实验材料要求:未纯化的PCR产物及PCR电泳图片,PCR扩增引物序列PCR扩增用酶,如果使用含3'→5'外切酶活性的聚合酶,请提供PCR引物,我们将重新扩增PCR产物以保证能进行TA克隆操作。

TA克隆服务说明 
1、PCR产物TA克隆实验中,PCR片段越大,TA克隆难度越大;2、TA克隆实验中,我们使用的是大家常用 T载体作为标准T载体,如果对载体有特殊要求,请再实验之前告知客户服务人员。

实验外包:
1.基因组学:基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析

2.转录组学:microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq

3.蛋白质组学:2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM

4.基因检测:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR

5.蛋白质检测:Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA

6.病理检测:HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选

7.代谢组学:GC-MS、LC-MS、NMR

8.细胞及动物模型:原代细胞、细胞模型、动物模型构建

9.SCI论文:SCI论文评估建议、SCI论文设计咨询、SCI论文统计资料处理、SCI论文实验操作咨询、SCI论文编修翻译等

目前,基尔顿生物科技(上海)有限公司,主营实验技术服务、SCI论文服务、动物模型构建、细胞株、elisa试剂盒等,欢迎广大科研爱好者前来咨询选购!

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