HSV顺行跨单级突触标记武汉枢密脑科学技术有限公司

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技术服务信息

服务名称:HSV顺行跨单级突触标记
服务类别:分子生物学服务 - 病毒转染系统服务
价格:询价
允许参观:允许参与实验
所在区域:湖北.武汉
更新时间:2019/11/19 9:55:00
浏览人数:62
诚信指数:531点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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武汉枢密脑科学技术有限公司
地址:
武汉市东湖高新技术开发区光谷七路128号 中科开物产业园枢密脑科学技术有限公司
邮编:
430074
电话:
15327213341
传真:
027-65023363
联系人:
李娟
所在区域:
湖北·武汉
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技术服务详细描述

锚点HSV顺行跨单级突触标记系统
背景
单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)属于疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科成员,能够特异感染神经系统。HSV对动物感染宿主范围广,能用于解析小鼠、大鼠及非人灵长类等动物的神经环路。HSV基因组为线状双链DNA分子,152 kb,能够携带较大片段的外源基因。根据抗原性的差别目前把该病毒分1型和2型。HSV-1 的嗜神经元和跨神经元传播的特性使它可被开发为理想的神经环路示踪工具。HSV-1McIntyre-B 株可以逆行跨神经元传播,而H129 株可以顺向跨神经元传播。
H129 作为顺向跨多级突触的示踪剂已经被报道用于多种动物模型的不同神经环路研究。表达荧光蛋白的重组H129 病毒可以用于标记输出性的神经网络,荧光信号的表达极大地方便了H129 作为示踪剂的使用。HSV 1型毒株H129HSV-1 H129)不仅能够标记中枢不同脑区之间的连接,也能标记外周与中枢不同脑区的连接。
    然而,对于特定的脑区或细胞群,用跨多级示踪剂标记出的结果并不能区分出直接的一级输出网络和多级输出网络。因此,神经科学研究迫切需要顺行跨单级的示踪系统。
HSV顺行跨单级突触病毒
锚点HSV-ΔTK-hUbC-tdTomato 是在HSV-tdTomatoHSV 1型毒株H129基因组整合一个tdTomato 基因)的基础上敲除胸苷激酶(thymidine kinase, TK)基因而获得。因为TK基因的敲除,HSV-ΔTK-hUbC-tdTomato 的体内跨突触传播能力受到限制。在表达TK 的辅助病毒的存在下,HSV-ΔTK-hUbC-tdTomato可以从起始神经元传播至突触后的神经元,从而标记出一个给定脑区或特定类型神经元的直接下一级受支配神经元。顺行一级跨突触标记系统极大地促进直接输出性神经网络的研究。

1. 神经元顺向跨单级标记示意图

现有的辅助病毒和HSV病毒列表如下:
案例展示
实例一:示踪nRT-PV 神经元下一级直接支配的神经元
锚点实验动物:PV-cre 系小鼠
使用的病毒:锚点H129-ΔTK-tdT 和辅助病毒AAV-DIO-TK-GFP
实验方法和结果:PV-cre小鼠nRT脑区先注射cre依赖的TK辅助病毒,3周后注射H129-ΔTK-tdT,然后一些小鼠在第25 天灌流取材确定跨突触的起始细胞;剩下的小鼠在第32 天取材可以在多个脑区检测到信号,这些脑区包括VPPo,VM等。

2. 锚点示踪nRT-PV 神经元下游直接支配的细胞(来源于武汉病毒所江海飞博士论文)
实例二:锚点Htr2c神经元直接支配EW神经元
实验动物:Htr2c-Cre 系小鼠
使用的病毒:H129-ΔTK-tdT 和辅助病毒AAV-DIO-TK-GFP
实验方法和结果:在锚点Htr2c-Cre小鼠vCA1脑区注射顺向跨单病毒,标记vCA1脑区Htr2c特异性神经元,一段时间后取材,可检测到EW脑区神经元被标记上了红色信号。表示EW区受上游vCA1脑区Htr2c神经元的直接支配。

2. vCA1脑区Htr2c神经元直接支配EW神经元Xinyan,et al, Nature Neuroscience,2018
现货列表:

病毒编号病毒名称携带外
源基因
病毒颜色及用途
H03001HSV-ΔTK-hUbC-tdTomato tdTomato红色,与AAV-TK连用可实现顺向跨单级
H03002HSV-ΔTK-LSL-tdTomatotdTomato红色,Cre依赖,与AAV-TK连用可实现顺向跨单级
PT-0087rAAV-EF1α-DIO-EGFP-T2A-TKEGFP-T2A-TKCre依赖,为HSV顺向跨单辅助病毒
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参考文献
  1. 江海飞. 水痘-带状疱疹病毒ORF7的功能解析及基于单纯疱疹病毒的新型顺行神经环路示踪工具[D]. 武汉: 国科学院武汉病毒研究, 2017.
  2. Li XChen WPan KLi HPang PGuo YShu SCai YPei LLiu DAfewerky HKTian QZhu LQLu Y. Serotonin receptor 2c-expressing cells in the ventral CA1 control attention via innervation of the Edinger-Westphal nucleus[J]. Nat Neurosci. 2018;21(9):1239-1250.

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