双荧光素酶报告基因的检测北京百奥思科生物科技有限公司

技术服务信息

服务名称:双荧光素酶报告基因的检测
服务类别:科研实验整体外包服务 - 整体实验服务外包
价格:详询19931682702
允许参观:允许参与实验
所在区域:河北.廊坊
更新时间:2020/12/21 15:03:00
浏览人数:30
诚信指数:5点
了解更多:进入公司展台
使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
点此求购 我要咨询
生物在线声明:以上所展示的信息由企业自行提供,内容的真实性、准确性和合法性由发布企业负责。生物在线对此不承担任何保证责任。

供应商联系卡

北京百奥思科生物科技有限公司
地址:
河北固安肽谷生物医药产业园
邮编:
电话:
19931682702
传真:
联系人:
石老师
所在区域:
河北·廊坊
邮件:
公司展台:

技术服务详细描述

双荧光素酶报告基因的检测


近年来,非编码RNA(Non-coding RNA)的研究成为热点,特别是microRNA的研究。发现一个新的miRNA,并研究其是否对相关疾病具有调控作用时,就需先对它和靶基因的调控关系做一验证,而目前最常用的靶向关系的验证方法就是:双荧光素酶报告基因检测。本文就相关检测原理、萤火虫荧光素酶、海肾萤光素酶、报告基因、检测步骤、细胞裂解及Luciferase检测作简单介绍。

检测原理
由于miRNA主要是通过作用于靶基因的3'UTR区域,这样就可以将目的基因3'UTR区域构建至含有报告基因萤光素酶的载体上,通过比较miRNA mimics或miRNA inhibitor作用后报告基因表达的改变(监测萤光素酶的活性变化)可以定量反映出miRNA对目的基因的抑制作用。结合定点突变等方法还可以进一步确定miRNA与靶基因3'UTR的作用位点。
萤火虫萤光素酶
    萤火虫荧光素是从甲虫(Photinus pyralis)中分离得到,分子量为61kDa的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以催化荧光素(luciferin)氧化成氧化荧光素(oxyluciferin),在luciferin氧化的过程中,会发出生物萤光(bioluminescence)。萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm。
海肾萤光素酶
海肾(Renilla)荧光素酶则是从海肾(Renilla reniformis)中分离,分子量为36kDa的蛋白,在氧气存在的条件下,可以催化腔肠素(coelenterazine)发生氧化,在coelenterazine氧化的过程中也会发出生物萤光(bioluminescence)。海肾萤光素酶催化coelenterazine发光的最强发光波长为465nm。
生物萤光可以通过荧光酶标仪进行测定,从而对实验结果进行定量。
报告基因
报告基因(report gene)是指一组编码易被检测的蛋白质或酶的基因,可通过报告基因产物的表达来“报告”目的基因的表达调控。
检测步骤
常规培养细胞后进行细胞转染:
(1)转染前一天将细胞计数,取2mL加入6孔板中,使得孔板的细胞密度不低于5*105个;
(2)对于每孔细胞,用250uL的无血清培养基稀释2μg DNA(质粒),室温孵育5min;
(3)对于每孔细胞,用250uL的无血清培养基稀释5uL Lipo2000,室温孵育5min;
(4) 将2和3中的液体混合,室温孵育20min;
(5) 将预先分好的贴壁细胞换成无血清培养基,加入上述复合物,在37℃,5%的CO2中培养6h,再换成完全培养基,继续在37℃,5%的CO2中培养,72h检测转染水平。
细胞裂解及Luciferase检测

RLU值的计算:在以海肾萤光素酶为内参的情况下,用萤火虫萤光素酶测定得到的RLU1值除以海肾萤光素酶测定得到的RLU2值。根据得到的比值来比较不同样品间目的报告基因的激活程度。如果以萤火虫萤光素酶为内参,也可以进行类似计算。

MDL服务项目

动物实验相关、WB、IP和Co-IP服务、蛋白质纯化、蛋白质双向电泳、明胶酶谱、细胞增殖、细胞培养、细胞周期凋亡、平板克隆、免疫荧光、免疫组化、常规及特殊染色、包埋切片爬片、定量pcr、elisa检测服务、普通生化试剂盒检测、全自动生化检测项目等。


MDL服务优势

项目均配备专职项目经理及技术支持,对每一项目进行全程跟踪反馈及管理,确保项目完成情况。周期短,价格优惠,质量保证,售后无忧;公司总部坐落于北京,实验室拥有4000多平的平台,拥有自己独立的实验室,相应的仪器设备及优秀的技术团队、销售团队,可随时参观,客户可参与实验。


联系我们:【电话】19931682702

                  【QQ】2177827493

生物在线声明:以上所展示的信息由企业自行提供,内容的真实性、准确性和合法性由发布企业负责。生物在线对此不承担任何保证责任。

查看双荧光素酶报告基因的检测 产品的用户还对以下产品感兴趣

  Affymetrix基因表达谱芯片服务   [供应商:上海伯豪生物技术有限公司/生物芯片上海国家工程研究中心]
  博士课题/硕士课题/整体实验外包服务   [供应商:威斯腾生物]
  整体实验设计和实验技术外包服务   [供应商:上海锐赛生物技术有限公司]
  全基因组重测序   [供应商:上海伯豪生物技术有限公司/生物芯片上海国家工程研究中心]
  临床实验/科研实验设计方案指导(课题承接)   [供应商:百奥迈科生物技术有限公司]
  蛋白质组学技术服务、生物技术药物分析   [供应商:北京正旦国际科技有限责任公司]
  miRNA芯片   [供应商:上海伯豪生物技术有限公司/生物芯片上海国家工程研究中心]
  病毒包装   [供应商:赛业(广州)生物科技有限公司]
  克隆服务   [供应商:上海英骏生物技术有限公司]

ADVERTISEMENT

找不到您所需的产品,发布求购试试?

标题:*
描述:
姓名:*
Email:*
单位:*
电话:*
地址:*
邮编:
资料: 需要 不需要
报价: 需要 不需要