细胞转染北京百奥思科生物科技有限公司

技术服务信息

服务名称:细胞转染
服务类别:细胞生物学服务 - 细胞因子生物检测服务
价格:详询【QQ】2177827493
允许参观:允许参与实验
所在区域:河北.廊坊
更新时间:2020/12/30 10:53:00
浏览人数:30
诚信指数:5点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京百奥思科生物科技有限公司
地址:
河北固安肽谷生物医药产业园
邮编:
电话:
19931682702
传真:
联系人:
石老师
所在区域:
河北·廊坊
邮件:
公司展台:

技术服务详细描述

细胞转染技术详解

一、细胞传代

1.   试验准备:200 ul/1mlTip头各一盒(以上物品均需高压灭菌),酒精棉球,废液缸,试管架,微量移液器,记号笔,培养皿,离心管。

2.   弃掉培养皿中的培养基,用1 ml的PBS溶液洗涤两次。

3.  用Tip头加入1 ml Trypsin液,消化1分钟(37℃,5%CO)。用手轻拍培养瓶壁,观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。

4.   加入1 ml的含血清培养基终止反应。

5.   用Tip头多次吹吸,使细胞完全分散开。

6.  将培养液装入离心管中,1 000 rpm离心5 min。

7.   用培养液重悬细胞,细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。

8.  将合适体积完全培养液加入离心管中,混匀细胞后轻轻加入培养皿中,使其均匀分布。

9.  将培养皿转入CO2培养箱中培养,第二天转染。

二、细胞转染

1.  转染试剂的准备

(1)将400 ul去核酸酶水加入管中,震荡10秒钟,溶解脂状物。

(2)震荡后将试剂放在-20℃保存,使用前还需震荡。

2.   选择合适的混合比例(1:1-1:2/脂质体体积:DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA,震荡后在加入合适体积的转染试剂,再次震荡。

3.  将混合液在室温放置10-15分钟。

4.  吸去培养板中的培养基,用PBS或者无血清培养基清洗一次。

5.  加入混合液,将细胞放回培养箱中培养一个小时。

6.  到时后,根据细胞种类决定是否移除混合液,之后加入完全培养基继续培养24-48小时。

三、第二次细胞传代

1.   在转染后24小时,观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。

2.   再次进行细胞传代,按照免疫染色合适的密度0.8X105个细胞/35 mm培养皿将细胞重新粉入培养皿中。

3.   在正常条件下培养24小时后按照染色要求条件固定。

4.  转染条件优化可以参考TransFast的使用说明书。

联系我们:【电话】19931682702

                    【QQ】2177827493

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