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荧光定量PCR(QPCR)武汉傲星生物科技有限公司

技术服务信息

服务名称:荧光定量PCR(QPCR)
服务类别:分子生物学服务 - 实时定量PCR服务
价格:询价
允许参观:协商决定
所在区域:湖北.武汉
更新时间:2022/6/23 13:43:00
浏览人数:38
诚信指数:5点
了解更多:进入公司展台
使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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供应商联系卡

武汉傲星生物科技有限公司
地址:
武汉东湖新技术开发区光谷大道70号B-1栋(原5栋)2楼S02号
邮编:
/
电话:
18062054798
传真:
/
联系人:
杨雨
所在区域:
湖北·武汉
邮件:
公司展台:

技术服务详细描述

 

 

实验概念

RT-PCR即逆转录pcr,其原理是提取组织或细胞中的总RNA,利用Oligo(dt)或随机引物反转录,获得cDNA模板,进一步通过PCR反应获得目的基因产物或检测其表达水平。与其他技术相比,RT-PCR技术更加灵敏易于操作,在细胞/组织基因表达水平的半定量检测,特定基因cDNA克隆及RNA病毒检测等分子生物学领域得到广泛应用。

实验流程

样本接收→引物合成→提取总RNA→RNA浓度测定→逆转录成cdna→荧光定量PCR→数据分析

注意事项

1.普通PCR及realtime PCR样本 注意事项

样本形式

处理方式

保存

运输

可检测指标数

新鲜组织

10.1g新鲜组织(至少)

液氮或-80℃

干冰

3-5

2、 加入1mlTrizol可选

细胞

1、 培养基吸出弃掉,用PBS洗涤两次后,吸弃PBS

液氮或-80℃

干冰

2-3

2、 每1*10^6个细胞加1ml TRIzol,细胞刮板挂或吹打使细胞脱落,吹至拉丝状,收集之后冻存备用。

全血

1大于等于2ml全血加入EDTA或肝素抗凝

4℃

冰袋

3-5

 

24h内进行淋巴细胞分离

液氮或-80℃

干冰

询问

体液

1. 12000rpm/min离心10-20min取沉淀

液氮或-80℃

干冰

询问

1.组织在1-2min内完成取材,速冻,,并立即放入-80℃或液氮中保存。
2. 有条件的话,最好先将样本在液氮中速冻,再转入-80℃冰箱中保存。
3.使用的冻存管最好也用DEPC处理。
4.对于组织及细胞样本,如果没有液氮或-80℃冰箱,也可用RNAlater保存,但是组织一定要切成比较小的块状,-20℃保存运输。

 

实验结果

扩增完毕后,进入结果分析界面,看CT值、起始拷贝数、标准偏差等,如果是SYBR做的话,再看下溶解曲线。以β-actin为内参照基因,与对照组相比,得到目的基因表达的相对定量值(RQ值),将RQ值用于统计分析。

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