端粒酶活性检测苏州琪霖智检细胞生物技术有限公司

技术服务详细描述

1、研究背景理论：

端粒酶（Telomerase），在细胞中负责端粒的延长的一种酶，是基本的核蛋白逆转录酶，由RNA模板和催化蛋白组成。可将端粒DNA加至真核细胞染色体末端，把DNA复制损失的端粒填补起来，使端粒修复延长，可以让端粒不会因细胞分裂而有所损耗，使得细胞分裂的次数增加。

端粒有重要的生物学功能，可稳定染色体的功能，防止染色体DNA降解、末端融合，保护染色体结构基因DNA，调节正常细胞生长。

端粒在不同物种细胞中对于保持染色体稳定性和细胞活性有重要作用，端粒酶能延长缩短的端粒（缩短的端粒其细胞复制能力受限），从而增强体外细胞的增殖能力。

端粒酶在保持端粒的结构稳定、基因组完整性、保持细胞长期的分裂活性和潜在的继续增殖能力等方面有重要作用。端粒酶在正常人体组织中的活性被抑制，在肿瘤中被重新激活，从而可能参与恶性转化。

细胞内端粒酶的多少可预测端粒的长短。正常人体细胞中检测不到端粒酶。一些良性病变细胞，体外培养的成纤维细胞中也测不到端粒酶活性。但在生殖细胞睾丸、卵巢、胎盘及胎儿细胞中此酶为阳性。

令人注目的发现是，恶性肿瘤细胞具有高活性的端粒酶，端粒酶阳性的肿瘤有卵巢癌、淋巴瘤、急性白血病、乳腺癌、结肠癌、肺癌等等。人类肿瘤中广泛地存在着较高的端粒酶活性。这样一来，我们又发现了一种肿瘤细胞的特异物质。

端粒（telomere）是真核细胞生物染色体末端的特殊DNA-蛋白结构，含有多个重复序列，人类为由6个碱基重复序列（TTAGGG）和结合蛋白组成,。

有证据表明，由于正常细胞线性DNA复制时5'末端消失，随着体细胞不断增殖，端粒DNA长度逐渐缩短，与细胞寿命密切相关，而端粒的合成又依赖于端粒酶（Telomerase）的活性。

故有人称端粒为正常细胞的“分裂钟”（Mistosis clock），端粒长短和稳定性决定了细胞寿命，并与细胞衰老和癌变密切相关。

研究发现，在绝大多数的恶性肿瘤组织及肿瘤细胞株中有高活性的端粒酶表达，而正常体细胞则不能检测出端粒酶活性。因此，对组织或细胞的端粒酶活性检测具有重要的意义。

端粒酶的活性在真核细胞中可检测到，其功能是合成染色体末端的端粒，使因每次细胞分裂而逐渐缩短的端粒长度得以补偿，进而稳定端粒长度。主要特征是用它自身携带的RNA作模板，以dNTP为原料，通过逆转录催化合成后延长链5‘端DNA片段或外加重复单位。

端粒酶在细胞中的主要生物学功能，是通过其逆转录酶活性复制和延长端粒DNA来稳定染色体端粒DNA的长度。

近年有关端粒酶与肿瘤关系的研究进展表明，在肿瘤细胞中端粒酶还参与了对肿瘤细胞的凋亡和基因组稳定的调控过程。与端粒酶的多重生物学活性相对应，肿瘤细胞中也存在复杂的端粒酶调控网络。通过蛋白质-蛋白质相互作用在翻译后水平对端粒酶活性及功能进行调控，则是研究端粒酶调控机制的热点之一。

2、端粒酶的活性检测：

传统检测端粒酶活性方法需要大量组织，需要大量***或制胶时间，实验过程繁琐，且检测周期长。

TRAP法作为端粒酶活性检测的金标准，然而在结果节度使，以银染法PAGE胶捡测端粒酶为例：因通过条带的明细程度判读，存在结果主观判读，且重复性较差的不足。

本公司提供的端粒酶活性检测方案，是以TRAP法+毛细管电泳技术为基础，以HELA细胞作为阳性标准品，可以直观、准确地检出组织或细胞样本的TTAGGG六碱基的重复次数和TRAP扩增的序列长度。

样本要求：1×10⁶的活性状态细胞

检测周期：收到样本5-7个工作日

检测结果图谱：