生物样本STR种属鉴定及交叉污染检测苏州琪霖智检细胞生物技术有限公司

技术服务详细描述

细胞、组织身源认定或者个体识别是当今实验数据及实验数据准确性的重要内容。在DNA水平上进行个体同一认定是获取准确结论的最直接方法。

目前应用最广泛的技术是短串联重复序列（short tandem repeat,STR）复合扩增荧光检测技术。

细胞株STR鉴定目的：

（1）细胞系间有无交叉污染

（2）所培养细胞间是否同一来源

（3）细胞来源是否是人源

（4）细胞系是否发生转化

（5）是否有迹象表明细胞系有无遗传

（6）稳定倾向和表型多样性的倾向

STR基因组是一类广泛存在于真核生物基因组中的DNA串联重复序列，其核心序列长2-6BP，重复次数通常为15-30次。

STR基因组的高度多态性及其在基因传递过程中遵循孟德尔共显性遗传规律等特点，使得PCR-STR复合扩增荧光检测技术已成为国际法医学界、真核生物学研究、企业药物研发等领域不可或缺的一项重要技术手段。

在各国罪犯DNA数据库建设、细胞数据库建设、人源个体识别，鼠源个体识别、种属识别、亲权鉴定等等实践中发挥着越来越重要的作用

STR基因组由于其多态性主要源自核心序列重复次数在个体间的差异，因此利用STR可以有效进行细胞株鉴定。STR分型被ICLAC、ATCC、NIH等权威机构作为细胞株鉴定对的金标准

STR自动分型技术广泛应用于DNA分型实验，具有自动化程度高、快速、灵敏、准确、稳定、重复性好的特点。

常用的STR自动化分型技术主要步骤：多色荧光标记STR复合扩增，扩增产物自动毛细管电泳结合激光诱导的荧光检测，自动数据采集并分型。

实验室中细胞处于下列情况时，则需要考虑进行细胞种属鉴定:

(1)当收到一株新的细胞株进实验室时，需要确认细胞品种属时；

(2)某细胞株长期与不同种属细胞共同冻存时；

(3)从细胞库复苏后，对目标细胞株；

(4)细胞株传代超过5-10代后；

(5)当研究数据出现异常，有疑问时；

(6)当研究开始和结束时，需要对我们研究的细胞株

......

种属STR鉴定采用种属基因分型试剂盒，有效替代同工酶检测，单次检测即可确认种属及种属交叉污染情况。实现了人、小鼠、大鼠、仓鼠、猴、兔、猪、狗、牛、羊等10个种属某个特定种属的认定分型图谱，准确的数据与峰图确定其所含种属。确定细胞株种属的同时，也可***是否有其他种属的交叉污染。

提供样本类型：血浆，血清，细胞沉淀，细胞培养液，细胞冻存液，DNA，组织等(组织需要大于芝麻粒大小；细胞大于等于10⁶）

一、生物种属STR鉴定试验流程：

1、样本提供：细胞株细胞10⁵-10⁶个；组织样本（至少芝麻粒大小，加冰袋运输）；

2、取适量检材用Chelex100 提取DNA；

3、取适量该样本 DNA 用种属荧光复合引物 MIX 对动物线粒体 COI 基因进行扩增（参考文献：Species identification in cell culture: a two-pronged molecular approach，In Vitro Cellular & Developmental—Animal (2007)其中包括人、小鼠、大鼠、仓鼠、猴、兔、猪、狗、牛、羊等10个种属生物样本特异性引物；

4、使用ABI 3130XL型遗传分析仪上对扩增产物进行检测；

5、使用GeneMapper IDX软件(Applied Biosystems)对检测结果进行分析，

6、审核实验报告，提供实验报告给委托人或者企业单位。

二、STR分型图谱说明：

种属复合扩增MIX表

样本“样本ZS-2”的COI基因扩增产物，毛细管电泳图谱如下：

注: 内参基因: 18S; 人源特异引物: 5-HO

（1）绿色横条为对应的STR基因座名称；

（2）各STR基因座位置的对应的灰色条带为群体遗传学分析统计的不同等位基因的标准品对应的片段长度；

（3）横坐标为基因片段长度值范围：图谱显示范围一般为70b p-500bp；

（4）纵坐标为STR基因片段的信号强度，峰值越高表示当前检测时的样本相对浓度越高。