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细胞增殖 细胞增殖与细胞凋亡、细胞周期等是肿瘤研究的重要表型,是分子生物学和药理学研究解决的问题之一。通过在细胞中过表达或干扰某个基因研究基因对细胞增殖能力的影响,进一步研究基因的功能,或对细胞进行药物处理,研究药物对增殖的影响。 细胞增殖是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖,是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。细胞增殖的研究方法有很多,主要包括:CCK8/ CellTiter-Glo™等方法。 CCK-8实验 目的:考察目的基因对细胞的增殖能力产生的影响或药物对细胞增殖能力的影响 材料:目的细胞、稳转株(空载、目的基因) 步骤:细胞收集——细胞铺板——(药物处理)——细胞培养0、6、24、48、72小时后加入CCK-8处理,酶标仪检测 结果: 优势: 操作简单,避免细胞计数过程中人为因素的影响; 细胞用量少,检测灵敏度高,稳定; 可反复用酶标仪读板,检测时间灵活,不影响细胞进行后续实验; CCK-8产生的Formazan是水溶性的,无需换液,尤其适用于悬浮细胞,与MTT法相比更方便,更安全。 CTG实验 目的:考察目的基因对细胞的增殖能力产生的影响或药物对细胞增殖能力的影响 材料:目的细胞 步骤:细胞收集——细胞铺板——(药物处理)——细胞培养0、24、48、72、96小时后加入CellTiter-Glo™溶液用微孔板震荡器5分钟,于室温放置10分钟-酶标仪检测荧光值 结果: 优势: 同普通的MTT、CCK8法相比,CellTiter-Glo™发光活细胞检测系统的检测试剂具有最高灵敏度和较长的信号持续时间,此系统已经广泛地应用在生命科学研究领域中,如一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤***敏感性测定等; CellTiter-Glo™试剂和细胞培养中的常用培养基兼容,如RPMI1640、MEM、DMEM和 Ham's F12,也不受酚红和有机溶剂的影响,误差小,准确率高。
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