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免疫荧光(单标)

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产品名称: 免疫荧光(单标)

英文名称: immunofluorescence

产品编号: YK1561

产品价格: 80元/张

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品牌商标: null

更新时间: 2023-11-15T09:44:20

使用范围: null

西安依科生物技术有限公司
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一、服务介绍:免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。二、实验流程:1.石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗;
2.抗原修复:组织切片置于盛满柠檬酸(PH6.0)抗原修复液的高压锅内进行抗原修复,喷气计时2.5min, 自然冷却后将玻片置于 PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次,每次 5min;
3.灭活:0.3%甲醇过氧化氢灭活15min,PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次,每次 6min;
4.BSA 或者血清封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止抗体流走),在圈内滴加用 5%BSA,室温封闭 1h;
5.加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加按一定比例配好的一抗,切片平放于湿盒内 4°C 孵育过夜(湿盒内加少量水防止抗体蒸发);
6.加二抗:玻片置于 PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次,每次 8min。切片稍甩干后在圈内滴加与种属对应的二抗,覆盖组织,室温孵育120min。之后玻片置于 PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次,每次 8min;
7. DAPI染核:滴加 DAPI,室温孵育10min,之后玻片置于 PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次,每次 6min;
8.封片:抗荧光淬灭剂封片;
9.镜检拍照:切片于荧光显微镜下观察并采集图像。(DAPI紫外激发波长330-380nm,发射波长420nm,发蓝光;FITC激发波长465-495nm,发射波长515-555 nm,发绿光;CY3激发波长510-560,发射波长590nm,发红光)。 三、服务周期:3-5天