siRNA合成/慢病毒包装/RNA干扰服务威斯腾生物

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技术服务信息

服务名称:siRNA合成/慢病毒包装/RNA干扰服务
服务类别:分子生物学服务 - siRNA/miRNA服务
价格:欢迎来电详询023-65316016,023—65316556
允许参观:允许参与实验
所在区域:重庆.重庆
更新时间:2019/12/13 14:58:00
浏览人数:4545
服务商:威斯腾生物
诚信指数:1719点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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威斯腾生物
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重庆高新区生物医药研发产业园D栋
邮编:
400039
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4006756758
传真:
023-65316016
联系人:
张老师
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技术服务详细描述

siRNA合成/慢病毒包装/腺病毒包装


siRNA合成

siRNA合成是机体或细胞实现基因沉默最为简捷的方法,成本低、转染效率高,是RNAi临床治疗的最佳手段,在药物开发方面具有不可替代的优势。 通用生物可为客户提供普通的化学合成siRNA,同时可根据客户需求,提供多种修饰的siRNA。


慢病毒包装

慢病毒Lentivirus是逆转录病毒的一种,具有逆转录病毒的基本结构和特性;能整合入宿主细胞因组,长期表达,可用于转基因动物制备;但也有不同于逆转录病毒的组分和特性;比逆转录病毒具有更高的滴度,不仅可以感染分裂细胞,更重要的是还能感染非分裂的细胞。

利用Lentivirus构建的shRNA表达载体,与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比,一方面可以替代后者,另一方面,Lentivirus-shRNA载体经包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞(如原代细胞、悬浮细胞等),并且在感染后可以整合到受感细胞的基因组,进行长时间的稳定表达,是制备稳定表达shRNA细胞株和进行体内实验(in vivo)的最有效手段。
目前我们能够为客户提供从载体构建到慢病毒包装纯化和检测的一站式服务; 同时公司还在高效慢病毒生产技术的基础上建立并完善了慢病毒载体制备转基因动物的实验技术。

慢病毒载体构建包装流程

  1. 根据目的基因相关信息(序列,基因序列号等),构建含有外源基因或序列的重组载体;
  2. 对于测序正确的重组质粒,提取和纯化高质量(不含内毒素)的重组质粒;
  3. 使用高效重组载体和慢病毒包装质粒共转染293T 细胞,进行病毒包装并收集上清液;
  4. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒;
  5. 用病毒液感染293T细胞,测定病毒滴度;

用高质量的病毒液感染靶细胞,通过定量PCR或者Westenblot检测目的基因表达,也可以进一步进行稳定细胞株的筛选用于长期的功能学研究。

RNAi与慢病毒载体技术服务

近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(PTGS)被称为RNA干扰(RNAi)。通过构建RNAi表达载体制备shRNA(发卡结构小干扰RNA),已成为进行RNA干扰实验的常用手段之一。 而目前为了感染原代细胞和难感染的细胞系或者在动物水平进行RNAi,研究科学家更多的选择了慢病毒载体。在RNAi研究中,为了感染原代细胞和难感染的细胞系,科学家开始借助于病毒载体实现RNAi;由于慢病毒可以同时感染分裂和非分裂细胞、整合性以及免疫原性低等优点,目前在RNAi的研究中,基于慢病毒构建的shRNA被最广泛的使用。    

                      慢病毒感染图片                                                

腺病毒包装

腺病毒(adenovirus)是一种没有包膜的直径为7090 nm的颗粒,由252个壳粒呈廿面体排列构成。每个壳粒的直径为79 nm。衣壳里是线状双链DNA分子,约含35 000 bp,两端各有长约100 bp的反向重复序列。由于每条DNA链的5,端同相对分子质量为55X103Da的蛋白质分子共价结合,可以出现双链DNA的环状结构。人体腺病毒已知有33种,分别命名为adlad33,研究得最详细是ad2。腺病毒基因组转录产生mRNA,已知的转录单位至少有5个:正Ⅰ区位于病毒基因组左侧,可再分成正ⅠA和正B,与细胞转化有关;正Ⅱ区编码DNA结合蛋白,参与病毒的复制;正Ⅲ区编码出现在宿主细胞表面的一种糖蛋白;正Ⅳ区位于ad2基因组右端,受正Ⅱ区编码的DNA结合蛋白质调控;第5个转录单位在病毒感染中期合成ad2蛋白质Ⅳ。 
腺病毒特性:
威斯腾生物腺病毒表达系统是以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA为骨架,在克隆、包装、扩增等各部分条件做了改进和优化,达到了克隆阳性率更高、质量更可靠、包装稳定、出毒迅速、滴度高等效果。在此基础上,提供各种带有不同报告基因、不同标签的重组腺病毒载体服务。同时我们还可以根据客户需要完成各种较高难度的载体构建,如双基因载体构建,具有细胞毒性作用基因的腺病毒载体构建等。所得到的毒液可以用于信号转导、基因转位、Co-IP、动物实验、干细胞研究等科研实验。
我们的服务:
1)表达目的基因的重组腺病毒载体构建服务(最大插入片段5kb
2)超大量及超高滴度的重组腺病毒扩增和纯化服务
3)重组腺病毒载体的鉴定
4shRNA基因沉默效应验证
5)表达shRNA的重组腺病毒载体的构建服务
6)构建各种带不同标签和不同报告基因的腺病毒载体
7)可调控表达的重组腺病毒载体
8)目的基因的克隆,或者定购
9)质量控制
服务承诺:
1)我们承诺从得到cDNA到完成纯化的服务时间将在70个工作日内完成
2)我们承诺所提供的病毒毒液的滴度在1011PFU/ml以上(纯化后),总量不少于1012 PFU/ml
3 所提供的毒液量:23ml
4 可以包装任何有细胞毒性作用的基因;保证100%的包装成功率

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