病毒包装赛业（广州）生物科技有限公司

技术服务详细描述

Cyagen目前提供慢病毒包装服务。

一、慢病毒包装

赛业生物采用第3代重组慢病毒包装系统制备病毒颗粒。为了增加慢病毒的安全性能，病毒制备所必需的元件序列被拆分到4个质粒当中，分别是：

1）1个编码目的基因的慢病毒转移质粒。目的基因两侧各有一个LTR（long terminal repeat）序列，LTR序列促使目的基因整合到目的细胞基因组里。为了提高安全性能，转移质粒的3’ LTR缺失了部分序列，使得整合后的病毒基因组失去自我复制能力。
2）2个包装质粒。其中一个质粒编码Rev, 另外一个质粒编码Gag和Pol。
3）1个编码包膜蛋白的质粒。

利用上述质粒包装出来的重组慢病毒颗粒，被称为自我失活VSV-G假型慢病毒（self-inactivating VSV-G pseudotyped lentivirus）。

首先将转移质粒、包装质粒和包膜蛋白质粒转染到293T细胞。更换新鲜的培养基后，继续培养48～72小时。收集培养液，进行离心浓缩后，就可得到转导细胞级别的病毒颗粒。如果您想获得注射动物级别的超纯病毒颗粒，可以利用蔗糖超速离心进一步去除杂质，从而获得纯度更高的病毒颗粒。

二、CRISPR慢病毒包装

CRISPR/Cas9慢病毒系统可对基因组的特定位点进行精确编辑。其原理是核酸内切酶Cas9蛋白通过导向性RNA(guide RNA,gRNA)识别特定基因组位点并对双链DNA进行切割，从而实现细胞水平单基因或多基因敲除。CRISPR慢病毒缩短实验周期的同时，更能快速得到实验结果，省时省力。